Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 4830-1:2005 (hoàn toàn tương đương với ISO 6888-1:1999 và sửa đổi AMD 1:2003) do Bộ Khoa học và Công nghệ ban hành quy định phương pháp định lượng staphylococci có phản ứng dương tính coagulase trên đĩa thạch bằng kỹ thuật sử dụng môi trường thạch Baird-Parker. Dưới đây là phần tóm tắt chi tiết và chuyên sâu về Phần mở đầu cùng các điều khoản cốt lõi từ Điều 1 đến Điều 4 của tiêu chuẩn này.

• Tiêu chuẩn này quy định phương pháp chung để định lượng staphylococci có phản ứng dương tính coagulase trong các sản phẩm thực phẩm dành cho con người hoặc thức ăn dùng trong chăn nuôi.
• Phương pháp định lượng được thực hiện bằng cách đếm các khuẩn lạc thu được trên môi trường đặc (môi trường thạch chọn lọc Baird-Parker) sau khi tiến hành ủ ấm trong điều kiện hiếu khí ở nhiệt độ 35 độ C hoặc 37 độ C.
• Tiêu chuẩn này được thiết kế để áp dụng cho hầu hết các loại thực phẩm, tuy nhiên do tính đa dạng của sản phẩm, phương pháp này có thể không hoàn toàn phù hợp cho một số trường hợp đặc biệt cần có các kỹ thuật chuyên biệt hơn.

• Việc áp dụng tiêu chuẩn này đòi hỏi phải kết hợp chặt chẽ với các tài liệu viện dẫn quan trọng để đảm bảo tính đồng bộ và chính xác của quy trình thử nghiệm.
• TCVN 6507 (ISO 6887) về vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi - Hướng dẫn chung về chuẩn bị mẫu thử, huyền phù ban đầu và các dung dịch pha loãng thập phân để kiểm tra vi sinh vật.
• TCVN 6404 (ISO 7218) về vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi - Nguyên tắc chung về kiểm tra vi sinh vật.
• Đối với các tài liệu viện dẫn ghi năm công bố thì áp dụng bản được nêu. Đối với các tài liệu viện dẫn không ghi năm công bố thì áp dụng phiên bản mới nhất bao gồm cả các sửa đổi, bổ sung.

• Staphylococci có phản ứng dương tính coagulase: Được định nghĩa là những vi khuẩn hình thành các khuẩn lạc điển hình và/hoặc không điển hình trên bề mặt môi trường nuôi cấy chọn lọc (thạch Baird-Parker) và cho phản ứng đông huyết tương (coagulase) dương tính rõ rệt khi tiến hành thử nghiệm khẳng định theo các bước quy định trong tiêu chuẩn.
• Khuẩn lạc điển hình (Typical colonies): Là các khuẩn lạc có màu đen hoặc xám đen, bóng, lồi, đường kính từ 1 mm đến 2,5 mm sau 24 giờ đến 48 giờ ủ. Các khuẩn lạc này được bao quanh bởi một vùng trong suốt (vùng phân giải lecithin). Một đường vòng mờ đục hẹp có thể xuất hiện ngay sát bên trong vùng trong suốt này.
• Khuẩn lạc không điển hình (Atypical colonies): Là các khuẩn lạc có cùng kích thước và màu sắc như khuẩn lạc điển hình nhưng không có vùng trong suốt bao quanh, hoặc xuất hiện dưới dạng các khuẩn lạc màu xám không có các đặc điểm điển hình nêu trên, thường gặp ở các mẫu thực phẩm bị ức chế hoặc bị biến đổi sinh lý.

• Cấy mẫu thử: Tiến hành cấy một lượng thể tích xác định của mẫu thử dạng lỏng, hoặc một lượng thể tích xác định của huyền phù ban đầu đối với các dạng sản phẩm khác, lên bề mặt đĩa môi trường nuôi cấy chọn lọc thạch Baird-Parker.
• Chuẩn bị các độ pha loãng tiếp theo: Thực hiện tương tự với các dung dịch pha loãng thập phân tiếp theo của mẫu thử trong cùng điều kiện để đảm bảo dải mật độ vi sinh vật phù hợp cho việc đếm khuẩn lạc sau này.
• Ủ ấm hệ thống: Tiến hành ủ các đĩa thạch đã cấy trong điều kiện hiếu khí ở nhiệt độ 35 độ C hoặc 37 độ C. Thời gian ủ ban đầu là 24 giờ, sau đó kiểm tra và tiếp tục ủ thêm đến 48 giờ nếu cần thiết để phát hiện đầy đủ các khuẩn lạc.
• Tính toán và khẳng định kết quả: Đếm số lượng khuẩn lạc điển hình và/hoặc không điển hình xuất hiện trên đĩa thạch. Chọn lọc ngẫu nhiên các khuẩn lạc nghi ngờ để tiến hành thử nghiệm khẳng định bằng phản ứng đông huyết tương (coagulase) với huyết tương thỏ. Tính toán số lượng staphylococci dương tính coagulase trên mỗi gam hoặc mỗi mililít mẫu thử ban đầu dựa trên tỷ lệ khuẩn lạc đã được khẳng định dương tính.