Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 7924-3:2008 (ISO/TS 16649-3:2005) là một phần quan trọng trong hệ thống tiêu chuẩn quốc gia về vi sinh vật học thực phẩm và thức ăn chăn nuôi. Văn bản này quy định chi tiết phương pháp định lượng vi khuẩn Escherichia coli dương tính beta-glucuronidaza bằng kỹ thuật tính số có xác suất lớn nhất (MPN) sử dụng chất nền sinh màu đặc trưng.

Dưới đây là tóm tắt chi tiết nội dung Phần mở đầu và các điều khoản đầu tiên (từ Điều 1 đến Điều 4) của tiêu chuẩn:

Điều 1: Phạm vi áp dụng

• Tiêu chuẩn này quy định phương pháp chung để định lượng vi khuẩn Escherichia coli dương tính beta-glucuronidaza bằng kỹ thuật môi trường lỏng, cụ thể là phương pháp số có xác suất lớn nhất (MPN).
• Phương pháp này được áp dụng rộng rãi cho các sản phẩm thực phẩm phục vụ nhu cầu tiêu dùng của con người, các sản phẩm thức ăn chăn nuôi, cũng như các mẫu môi trường trong khu vực sản xuất và xử lý thực phẩm.
• Kỹ thuật MPN đặc biệt phù hợp và được khuyến nghị sử dụng đối với các mẫu thực phẩm dự kiến có mật độ vi khuẩn E. coli thấp, hoặc các mẫu chứa tế bào vi khuẩn có khả năng bị tổn thương do các quá trình xử lý công nghiệp như sấy khô, đông lạnh, hoặc xử lý nhiệt nhẹ.

Điều 2: Tài liệu viện dẫn

• Tiêu chuẩn này tích hợp các quy định từ các tài liệu viện dẫn cốt lõi về vi sinh vật học thực phẩm để đảm bảo tính đồng bộ và chuẩn xác trong quy trình thực hiện.
• Các tài liệu viện dẫn bao gồm các tiêu chuẩn chung về hướng dẫn kỹ thuật vi sinh vật, quy trình chuẩn bị mẫu thử, huyền phù ban đầu và các dung dịch pha loãng thập phân để kiểm tra vi sinh vật.
• Việc áp dụng tiêu chuẩn bắt buộc phải tuân thủ các phiên bản mới nhất của các tài liệu viện dẫn liên quan để đảm bảo tính cập nhật và chính xác về mặt khoa học.

Điều 3: Thuật ngữ và định nghĩa

• Escherichia coli dương tính beta-glucuronidaza: Được định nghĩa là những vi khuẩn có khả năng sinh trưởng và phát triển ở nhiệt độ ủ quy định trong môi trường lỏng chọn lọc, đồng thời tạo ra phản ứng dương tính (sinh màu xanh lam hoặc xanh lá cây đặc trưng) trên môi trường thạch chứa chất nền sinh màu 5-bromo-4-clo-3-indolyl beta-D-glucuronid dưới các điều kiện thử nghiệm được mô tả trong tiêu chuẩn.
• Số có xác suất lớn nhất (MPN): Là trị số ước lượng mật độ vi khuẩn sống có trong một đơn vị thể tích hoặc khối lượng mẫu thử, được tính toán dựa trên các công thức thống kê từ số lượng các ống nghiệm cho kết quả dương tính ở các độ pha loãng khác nhau.

Điều 4: Nguyên tắc của phương pháp

• Giai đoạn tăng sinh trong môi trường lỏng chọn lọc: Tiến hành cấy một lượng mẫu thử hoặc dung dịch pha loãng mẫu thử vào các ống nghiệm chứa môi trường lỏng chọn lọc (thường là môi trường glutamate cải tiến). Quá trình ủ ban đầu giúp phục hồi các tế bào vi khuẩn bị tổn thương trước khi chuyển sang giai đoạn chọn lọc nghiêm ngặt hơn.
• Giai đoạn phân lập và khẳng định: Dịch cấy từ các ống nghiệm có biểu hiện sinh trưởng (đục hoặc đổi màu) được cấy chuyển tiếp sang môi trường thạch chọn lọc chứa chất nền sinh màu 5-bromo-4-clo-3-indolyl beta-D-glucuronid (thường là thạch TBX) và tiến hành ủ ở nhiệt độ quy định.
• Đọc kết quả khẳng định: Sự xuất hiện của các khuẩn lạc màu xanh lam hoặc xanh lá cây trên môi trường thạch khẳng định sự hiện diện của vi khuẩn E. coli dương tính beta-glucuronidaza do hoạt tính của enzym beta-glucuronidaza phân hủy chất nền sinh màu.
• Tính toán mật độ vi khuẩn: Dựa trên số lượng các ống nghiệm được xác nhận là dương tính ở mỗi độ pha loãng, người thử nghiệm tiến hành tra bảng MPN tiêu chuẩn để xác định số có xác suất lớn nhất của E. coli trên một gam hoặc một mililit mẫu thử ban đầu.