Giới thiệu chung về Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 10810:2015

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 10810:2015 quy định phương pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao (HPLC) để xác định hàm lượng diclazuril trong thức ăn chăn nuôi và premix. Đây là công cụ kỹ thuật quan trọng giúp các phòng thử nghiệm, cơ quan quản lý và doanh nghiệp kiểm soát chất lượng cũng như giới hạn an toàn của hoạt chất diclazuril (một loại chất kháng cầu trùng) trong thức ăn chăn nuôi.

Điều 1: Phạm vi áp dụng

Điều khoản này xác định rõ giới hạn và đối tượng áp dụng của phương pháp thử nghiệm:

• Phương pháp này áp dụng trực tiếp để xác định hàm lượng diclazuril trong các loại thức ăn chăn nuôi, bao gồm cả thức ăn hỗn hợp và premix (thức ăn bổ sung).
• Giới hạn định lượng của phương pháp được thiết lập phù hợp để phát hiện diclazuril ở cả mức hàm lượng vết (phục vụ kiểm tra nhiễm chéo) và mức hàm lượng hoạt chất bổ sung theo công thức phối trộn thương mại.

Điều 2: Tài liệu viện dẫn

Để áp dụng tiêu chuẩn này một cách chính xác, việc viện dẫn các tài liệu kỹ thuật liên quan là bắt buộc. Các tài liệu viện dẫn trong tiêu chuẩn này bao gồm:

• TCVN 6952 (ISO 6498) về Thức ăn chăn nuôi - Phương pháp chuẩn bị mẫu thử. Việc chuẩn bị mẫu đúng quy chuẩn là điều kiện tiên quyết để đảm bảo tính đại diện và độ lặp lại của kết quả phân tích sắc kí.
• Các tài liệu viện dẫn khác về an toàn phòng thí nghiệm và kiểm soát chất lượng nước dùng trong phân tích hóa học.

Điều 3: Nguyên tắc của phương pháp

Nguyên tắc phân tích hàm lượng diclazuril bằng HPLC được thực hiện qua các bước cốt lõi sau:

• Chiết xuất: Diclazuril có trong mẫu thử được chiết xuất bằng dung môi hữu cơ thích hợp (thường là hỗn hợp methanol, acetonitrile hoặc dung dịch đệm axit) để hòa tan tối đa hoạt chất ra khỏi nền mẫu thức ăn chăn nuôi phức tạp.
• Làm sạch mẫu (Clean-up): Dịch chiết sau đó được làm sạch bằng phương pháp lọc hoặc sử dụng cột chiết pha rắn (SPE) để loại bỏ các tạp chất hữu cơ có thể gây nhiễu đường nền hoặc làm hỏng cột sắc kí.
• Phân tích sắc kí: Dịch lọc sạch được tiêm vào hệ thống sắc kí lỏng hiệu năng cao (HPLC). Quá trình phân tách được thực hiện trên cột pha đảo (thường là cột C18) với pha động phù hợp.
• Phát hiện và định lượng: Diclazuril được phát hiện bằng detector tử ngoại (UV) hoặc detector mảng diod (DAD) ở bước sóng hấp thụ cực đại đặc trưng (thường khoảng 280 nm). Hàm lượng diclazuril được tính toán dựa trên diện tích pic hoặc chiều cao pic của mẫu thử so với đường chuẩn của chất chuẩn diclazuril tinh khiết.

Điều 4: Thuốc thử và vật liệu thử

Để đảm bảo độ chính xác cao, tiêu chuẩn yêu cầu sử dụng các loại hóa chất, thuốc thử có độ tinh khiết phân tích cao (dùng cho HPLC):

• Chất chuẩn: Diclazuril chuẩn có hàm lượng tinh khiết đã biết rõ (thường lớn hơn 99%).
• Dung môi: Acetonitrile, methanol, nước cất siêu sạch (nước dùng cho HPLC), tetrahydrofuran (THF) và các axit/muối đệm như axit phosphoric, amoni axetat để điều chỉnh pH pha động.
• Dung dịch chuẩn gốc (Stock solution): Được chuẩn bị bằng cách hòa tan một lượng chính xác chất chuẩn diclazuril trong dung môi phù hợp để đạt nồng độ xác định, bảo quản ở điều kiện lạnh, tránh ánh sáng.
• Dung dịch chuẩn làm việc (Working solutions): Được pha loãng từ dung dịch chuẩn gốc thành dãy nồng độ khác nhau để xây dựng đường chuẩn phục vụ quá trình định lượng.