Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 9677:2013 (hoàn toàn tương đương với tiêu chuẩn quốc tế ISO 7847:1987) quy định phương pháp enzym để xác định các axit béo chưa bão hòa đa có cấu trúc cis, cis 1,4-dien trong dầu mỡ động vật và thực vật. Dưới đây là tóm tắt chi tiết nội dung phần mở đầu và các điều khoản đầu tiên từ Điều 1 đến Điều 4 của tiêu chuẩn này.

- Phạm vi áp dụng (Điều 1)

• Tiêu chuẩn này quy định phương pháp xác định hàm lượng các axit béo chưa bão hòa đa có chứa hệ thống liên kết đôi cis, cis 1,4-dien bằng phương pháp enzym.
• Phương pháp này áp dụng cụ thể cho các loại dầu mỡ động vật và thực vật có chứa các axit béo chưa bão hòa đa phổ biến như axit linoleic (9,12-octadecadienoic), axit linolenic (9,12,15-octadecatrienoic) và axit arachidonic (5,8,11,14-eicosatetraenoic).
• Tiêu chuẩn không áp dụng đối với các mẫu dầu mỡ đã bị oxy hóa nghiêm trọng hoặc chứa các hợp chất gây cản trở hoạt động xúc tác của enzym lipoxygenase.

- Tài liệu viện dẫn (Điều 2)

• Việc áp dụng tiêu chuẩn này đòi hỏi phải viện dẫn tài liệu kỹ thuật cốt lõi để đảm bảo tính đồng bộ trong quy trình thực nghiệm.
• Tài liệu được viện dẫn bắt buộc là TCVN 6128 (ISO 661) về Dầu mỡ động vật và thực vật - Chuẩn bị mẫu thử.
• Đối với các tài liệu viện dẫn có ghi năm công bố, các phiên bản được nêu sẽ được áp dụng. Đối với các tài liệu không ghi năm công bố, phiên bản mới nhất (bao gồm cả các sửa đổi, bổ sung) sẽ được áp dụng.

- Nguyên tắc của phương pháp (Điều 3)

• Phương pháp dựa trên phản ứng oxy hóa có xúc tác của enzym lipoxygenase đối với các axit béo có cấu trúc cis, cis 1,4-dien để tạo thành các hydroperoxit có chứa các liên kết đôi liên hợp.
• Quá trình thực hiện bao gồm việc xà phòng hóa mẫu thử bằng dung dịch kiềm để giải phóng các axit béo tự do dưới dạng muối hòa tan.
• Sau khi bổ sung enzym lipoxygenase trong môi trường đệm thích hợp, phản ứng oxy hóa xảy ra chọn lọc trên các liên kết cis, cis 1,4-dien.
• Độ hấp thụ quang phổ của các hydroperoxit liên hợp sinh ra được đo bằng máy quang phổ ở bước sóng cực đại 234 nm.
• Hàm lượng axit béo chưa bão hòa đa được tính toán dựa trên độ tăng trị số hấp thụ quang học thu được sau phản ứng enzym.

- Thuốc thử và vật liệu thử nghiệm (Điều 4)

• Yêu cầu chung: Tất cả các hóa chất, thuốc thử được sử dụng phải đạt độ tinh khiết phân tích. Nước dùng trong quá trình thử nghiệm phải là nước cất hoặc nước có độ tinh khiết tương đương, đã được loại bỏ oxy hòa tan bằng cách đun sôi hoặc sục khí trơ.
• Dung dịch kali hydroxit (KOH): Sử dụng dung dịch KOH nồng độ khoảng 1 mol/l hoặc nồng độ thích hợp để tiến hành quá trình xà phòng hóa mẫu dầu mỡ ở nhiệt độ phòng nhằm tránh làm biến tính các axit béo nhạy cảm.
• Dung dịch đệm borat: Thường sử dụng đệm natri borat hoặc kali borat có pH ổn định ở mức 9,0, là môi trường tối ưu cho hoạt động xúc tác của enzym lipoxygenase.
• Enzym lipoxygenase: Có nguồn gốc từ đậu nành (soybean lipoxygenase), dạng bột đông khô hoặc dung dịch đậm đặc, có hoạt tính xúc tác đặc hiệu cao đối với cấu trúc cis, cis 1,4-dien. Enzym phải được bảo quản ở nhiệt độ thấp theo chỉ dẫn của nhà sản xuất để tránh mất hoạt tính.
• Axit linoleic chuẩn: Có độ tinh khiết tối thiểu 99%, được sử dụng làm chất chuẩn đối chứng để kiểm tra hoạt tính của enzym và xây dựng đường chuẩn hiệu chuẩn thiết bị đo.