Tổng quan về Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8476:2010

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8476:2010 quy định phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) để xác định hàm lượng taurine trong sữa bột và thức ăn dạng bột theo công thức dành cho trẻ sơ sinh. Đây là văn bản kỹ thuật quan trọng giúp các phòng thử nghiệm và cơ quan quản lý kiểm soát chính xác hàm lượng chất dinh dưỡng taurine bổ sung trong thực phẩm dành cho trẻ nhỏ.

Điều 1: Phạm vi áp dụng

Tiêu chuẩn này quy định phương pháp xác định hàm lượng taurine tự do và taurine liên kết trong các đối tượng mẫu sau:

• Sữa bột công thức dành cho trẻ sơ sinh.
• Thức ăn dạng bột theo công thức dành cho trẻ sơ sinh.
• Các sản phẩm dinh dưỡng công thức đặc biệt khác dành cho trẻ nhỏ có chứa hoặc bổ sung taurine.

Điều 2: Tài liệu viện dẫn

Để áp dụng tiêu chuẩn này một cách chính xác, cần viện dẫn các tài liệu kỹ thuật cốt lõi sau đây. Đối với các tài liệu viện dẫn ghi năm công bố thì áp dụng phiên bản được nêu; đối với các tài liệu không ghi năm công bố thì áp dụng phiên bản mới nhất (bao gồm cả các sửa đổi, bổ sung):

• TCVN 4851 (ISO 3696), Nước dùng cho phòng thí nghiệm phân tích - Yêu cầu kỹ thuật và phương pháp thử.
• Các tiêu chuẩn quốc gia và quốc tế liên quan đến quy trình lấy mẫu, chuẩn bị mẫu thử đối với sữa và sản phẩm sữa.

Điều 3: Nguyên tắc của phương pháp

Phương pháp xác định hàm lượng taurine bằng sắc ký lỏng được thực hiện dựa trên nguyên tắc kỹ thuật nghiêm ngặt sau:

• Hòa tan và chiết tách: Mẫu sữa bột hoặc thức ăn dạng bột được hòa tan hoàn toàn trong nước ấm hoặc dung dịch đệm thích hợp để giải phóng toàn bộ lượng taurine có trong mẫu.
• Kết tủa protein loại tạp chất: Tiến hành loại bỏ các thành phần protein, chất béo và các chất phân cực lớn dễ gây nhiễu bằng cách sử dụng các tác nhân kết tủa hóa học phù hợp, sau đó tiến hành lọc hoặc ly tâm để thu lấy dịch lọc trong suốt chứa taurine.
• Phản ứng dẫn xuất hóa (Derivatization): Do phân tử taurine không có nhóm chức hấp thụ UV hoặc phát huỳnh quang đủ mạnh, dịch lọc sau khi làm sạch phải được cho phản ứng dẫn xuất hóa với thuốc thử chuyên dụng (như dansyl clorua, o-phthalaldehyde - OPA, hoặc các thuốc thử tương đương) để tạo ra dẫn xuất taurine có khả năng phát hiện nhạy bén.
• Phân tích sắc ký lỏng (HPLC): Dịch sau dẫn xuất được bơm vào hệ thống sắc ký lỏng pha đảo (RP-HPLC). Quá trình tách được thực hiện trên cột sắc ký thích hợp và được phát hiện bằng detector huỳnh quang (FLD) hoặc detector tử ngoại (UV) tại bước sóng tối ưu.
• Tính toán kết quả: Hàm lượng taurine trong mẫu được định lượng bằng phương pháp ngoại chuẩn, so sánh diện tích pic hoặc chiều cao pic của mẫu thử với đường chuẩn của dung dịch taurine chuẩn được phân tích trong cùng điều kiện.

Điều 4: Thuốc thử và vật liệu thử

Trong suốt quá trình phân tích, chỉ sử dụng các hóa chất, thuốc thử có cấp độ tinh khiết phân tích dùng cho sắc ký (HPLC grade) và nước sử dụng phải đạt tối thiểu loại 3 theo tiêu chuẩn TCVN 4851 (ISO 3696):

• Taurine chuẩn (C2H7NO3S): Chất chuẩn có độ tinh khiết hóa học không nhỏ hơn 99%, dùng để pha chế dung dịch chuẩn gốc và các dãy dung dịch chuẩn làm việc phục vụ dựng đường chuẩn.
• Thuốc thử dẫn xuất hóa: Các hóa chất như Dansyl clorua, OPA hoặc FMOC-Cl, được chuẩn bị và bảo quản nghiêm ngặt trong điều kiện tránh ánh sáng và nhiệt độ thấp để đảm bảo hoạt tính phản ứng.
• Dung môi và pha động: Axetonitril, metanol, nước siêu tinh khiết và các muối đệm photphat hoặc axetat đạt tiêu chuẩn HPLC, được lọc qua màng lọc 0,45 micromet và khử khí trước khi vận hành hệ thống sắc ký.
• Dung dịch điều chỉnh pH: Các dung dịch axit clohydric (HCl) hoặc natri hydroxit (NaOH) loãng được sử dụng để điều chỉnh pH của môi trường phản ứng dẫn xuất hóa và pha động về trị số tối ưu theo yêu cầu kỹ thuật.