Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 11509:2016 hoàn toàn tương đương với tiêu chuẩn quốc tế ISO 2164:1975, quy định phương pháp xác định hàm lượng axit hydrocyanic liên kết dưới dạng glycosid (axit hydroxyanic glycosidic) trong các loại đậu đỗ. Dưới đây là tóm tắt chi tiết nội dung phần mở đầu và các điều khoản từ Điều 1 đến Điều 4 của tiêu chuẩn này:

Phạm vi áp dụng (Điều 1)

• Tiêu chuẩn này quy định phương pháp cụ thể để xác định hàm lượng axit hydrocyanic glycosidic có trong các loại đậu đỗ.
• Phương pháp này đặc biệt áp dụng cho các giống đậu ngự (Phaseolus lunatus L.) và các loại đậu đỗ khác có khả năng sản sinh ra độc tố axit hydrocyanic thông qua quá trình thủy phân các glycosid sinh cyanogen (ví dụ như linamarin).
• Việc xác định này đóng vai trò quan trọng trong kiểm nghiệm an toàn thực phẩm, giúp đánh giá và kiểm soát giới hạn độc tố tự nhiên trong nông sản dùng làm thực phẩm cho người hoặc thức ăn chăn nuôi.

Tài liệu viện dẫn (Điều 2)

• Tiêu chuẩn áp dụng các tài liệu viện dẫn liên quan để đảm bảo tính thống nhất trong quy trình thử nghiệm. Các tài liệu viện dẫn bao gồm các tiêu chuẩn về lấy mẫu nông sản, lấy mẫu đậu đỗ và các phương pháp chuẩn bị mẫu thử chung.
• Đối với các tài liệu viện dẫn có ghi năm công bố thì áp dụng bản được nêu. Đối với các tài liệu viện dẫn không ghi năm công bố thì áp dụng phiên bản mới nhất, bao gồm cả các sửa đổi, bổ sung (nếu có).

Nguyên tắc của phương pháp (Điều 3)

• Quá trình thủy phân: Giải phóng axit hydrocyanic (HCN) tự do từ các glycosid sinh cyanogen bằng cách thủy phân bằng enzym. Quá trình này có thể tận dụng hệ enzym tự nhiên có sẵn trong mẫu thử (nếu mẫu chưa bị xử lý nhiệt làm mất hoạt tính enzym) hoặc bổ sung thêm enzym ngoại sinh (như emulsin) trong môi trường nước ấm ở nhiệt độ thích hợp.
• Quá trình chưng cất: Tiến hành chưng cất lôi cuốn hơi nước sau khi quá trình thủy phân kết thúc để tách hoàn toàn lượng axit hydrocyanic đã được giải phóng ra khỏi hỗn hợp phản ứng.
• Quá trình hấp thụ và xác định: Thu hồi lượng axit hydrocyanic bay hơi vào một dung dịch hấp thụ kiềm (thường là dung dịch natri hydroxit). Hàm lượng axit hydrocyanic trong dung dịch sau đó được xác định bằng phương pháp chuẩn độ bạc (argentometric titration) hoặc phương pháp đo phổ thích hợp tùy thuộc vào nồng độ độc tố có trong mẫu.

Thuốc thử và vật liệu (Điều 4)

• Nước cất: Sử dụng nước cất hoặc nước có độ tinh khiết tương đương, không chứa các tạp chất có thể gây ảnh hưởng đến hoạt tính enzym hoặc phản ứng chuẩn độ.
• Dung dịch axit hóa: Axit sunfuric hoặc axit photphoric được sử dụng để axit hóa hỗn hợp trước khi tiến hành chưng cất lôi cuốn hơi nước, đảm bảo khí HCN được giải phóng hoàn toàn.
• Dung dịch hấp thụ: Dung dịch natri hydroxit (NaOH) dùng để giữ và chuyển hóa khí HCN chưng cất được thành dạng muối natri xyanua ổn định trong dung dịch.
• Hóa chất chuẩn độ: Dung dịch bạc nitrat (AgNO3) chuẩn và dung dịch amoni thiocyanat (NH4SCN) chuẩn dùng cho quá trình chuẩn độ thể tích.
• Chất chỉ thị: Sử dụng kali iodua (KI) trong môi trường amoniac hoặc các chất chỉ thị màu chuyên dụng khác để xác định chính xác điểm tương đương trong quá trình chuẩn độ.
• Chế phẩm enzym emulsin: Yêu cầu sử dụng chế phẩm enzym có hoạt tính cao và ổn định để đảm bảo thủy phân hoàn toàn các glycosid trong trường hợp enzym tự nhiên của mẫu thử đã bị bất hoạt do quá trình chế biến hoặc bảo quản trước đó.