Giới thiệu chung về Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 10991:2015

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 10991:2015 hoàn toàn tương đương với tiêu chuẩn châu Âu CEN/TS 14537:2003. Tiêu chuẩn này quy định phương pháp xác định hàm lượng chất tạo ngọt neohesperidin-dihydrochalcon (NHDC) trong các sản phẩm thực phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC). Dưới đây là phần tóm tắt chi tiết và chuyên sâu các nội dung cốt lõi từ Điều 1 đến Điều 4 của tiêu chuẩn này.

- Điều 1: Phạm vi áp dụng

• Tiêu chuẩn này quy định quy trình phân tích định lượng neohesperidin-dihydrochalcon (NHDC) có trong các loại thực phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC).
• Phương pháp này đã được nghiên cứu, thử nghiệm liên phòng thử nghiệm thành công và khẳng định độ tin cậy cao đối với các nền mẫu thực phẩm phổ biến bao gồm: nước giải khát, nước quả, sản phẩm sữa (như sữa chua) và kẹo cao su.

- Điều 2: Tài liệu viện dẫn

• Các tài liệu viện dẫn là những văn bản bắt buộc phải áp dụng cùng với tiêu chuẩn này để đảm bảo tính chính xác của phép thử.
• Tài liệu viện dẫn cốt lõi được áp dụng là: TCVN 4851 (ISO 3696), Nước dùng cho phòng thử nghiệm phân tích - Yêu cầu kỹ thuật và phương pháp thử. Tiêu chuẩn này yêu cầu chất lượng nước sử dụng trong quá trình phân tích phải đạt các tiêu chuẩn nghiêm ngặt để không làm ảnh hưởng đến kết quả sắc ký.

- Điều 3: Nguyên tắc của phương pháp

• Chiết xuất hoạt chất: Neohesperidin-dihydrochalcon (NHDC) được giải phóng và chiết ra khỏi nền mẫu thực phẩm bằng nước hoặc bằng hỗn hợp dung môi thích hợp, tùy thuộc vào cấu trúc vật lý và hóa học của từng loại mẫu cụ thể.
• Làm sạch dịch chiết: Đối với các nền mẫu phức tạp có chứa nhiều tạp chất gây cản trở, dịch chiết sau khi thu được cần phải trải qua bước làm sạch bằng kỹ thuật chiết pha rắn (SPE) hoặc các biện pháp lọc màng thích hợp để bảo vệ cột sắc ký và nâng cao độ nhạy của phép đo.
• Phân tích trên hệ thống HPLC: Dịch lọc cuối cùng được tiêm vào hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao. Quá trình phân tách được thực hiện trên cột sắc ký pha đảo (thường là cột C18) và được phát hiện bằng detector tử ngoại (UV) hoặc detector mảng diod (DAD) ở bước sóng hấp thụ cực đại (thường dao động trong khoảng từ 280 nm đến 285 nm).
• Định lượng kết quả: Hàm lượng NHDC trong mẫu thử được tính toán dựa trên phương pháp ngoại chuẩn, thông qua việc so sánh diện tích pic hoặc chiều cao pic của mẫu phân tích với đường chuẩn được xây dựng từ các dung dịch chuẩn NHDC có nồng độ chính xác đã biết trước.

- Điều 4: Thuốc thử và vật liệu thử

• Yêu cầu về độ tinh khiết: Tất cả các hóa chất, dung môi được sử dụng trong quá trình phân tích phải thuộc loại tinh khiết hóa học chuyên dùng cho phân tích sắc ký (HPLC grade). Nước sử dụng phải là nước loại 1 theo quy định của TCVN 4851 hoặc có độ tinh khiết tương đương.
• Các hóa chất và dung môi chính:
  • Acetonitril (CH3CN) loại dùng cho HPLC.
  • Axit photphoric (H3PO4) hoặc Axit axetic (CH3COOH) dùng để điều chỉnh độ pH của pha động, giúp tối ưu hóa hình dạng pic sắc ký của NHDC.
  • Methanol (CH3OH) loại dùng cho HPLC, phục vụ cho quá trình chuẩn bị mẫu hoặc pha chế dung môi rửa giải.
• Chất chuẩn hóa học: Neohesperidin-dihydrochalcon (NHDC) chuẩn tinh khiết, có hàm lượng hoạt chất đã được xác định rõ ràng (thường yêu cầu độ tinh khiết tối thiểu từ 98% trở lên).
• Quy trình chuẩn bị dung dịch chuẩn:
  • Dung dịch chuẩn gốc NHDC: Được chuẩn bị bằng cách cân một lượng chất chuẩn chính xác bằng cân phân tích, sau đó hòa tan trong hỗn hợp dung môi thích hợp (như hỗn hợp nước và methanol). Dung dịch chuẩn gốc phải được bảo quản trong các lọ thủy tinh tối màu ở nhiệt độ lạnh để tránh bị phân hủy bởi ánh sáng và nhiệt độ.
  • Dung dịch chuẩn làm việc: Được pha loãng từ dung dịch chuẩn gốc bằng pha động hoặc dung môi phù hợp ngay trước khi tiến hành phân tích để thiết lập đường chuẩn phân tích (gồm tối thiểu 3 đến 5 điểm nồng độ khác nhau bao phủ khoảng nồng độ dự kiến của mẫu).