Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 8542:2010 (hoàn toàn tương đương với ISO 14181:2000) quy định phương pháp xác định hàm lượng bacitracin kẽm trong thức ăn chăn nuôi bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC). Dưới đây là tóm tắt chi tiết nội dung các điều khoản đầu (từ Điều 1 đến Điều 4) của tiêu chuẩn này:

- Điều 1: Phạm vi áp dụng

• Tiêu chuẩn này quy định phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) để xác định hàm lượng bacitracin kẽm trong thức ăn chăn nuôi, thức ăn hỗn hợp và premix.
• Phương pháp này áp dụng cho các sản phẩm thức ăn chăn nuôi có chứa bacitracin kẽm ở các mức nồng độ khác nhau, giúp kiểm soát chất lượng và hàm lượng chất phụ gia này trong quá trình sản xuất và lưu thông.
• Giới hạn định lượng của phương pháp được thiết lập để đảm bảo độ nhạy và độ chính xác cao, phù hợp với các yêu cầu kiểm tra hàm lượng vết cũng như hàm lượng hoạt chất chính trong premix.

- Điều 2: Tài liệu viện dẫn

• Các tài liệu viện dẫn trong tiêu chuẩn này là cực kỳ cần thiết cho việc áp dụng phương pháp. Đối với các tài liệu viện dẫn ghi năm công bố thì áp dụng bản được nêu. Đối với các tài liệu viện dẫn không ghi năm công bố thì áp dụng phiên bản mới nhất, bao gồm cả các sửa đổi, bổ sung (nếu có).
• Tiêu chuẩn liên quan chủ yếu đến các phương pháp lấy mẫu thức ăn chăn nuôi và các yêu cầu chung về phòng thử nghiệm hóa học để đảm bảo tính đồng nhất và đại diện của mẫu phân tích.

- Điều 3: Nguyên tắc của phương pháp

• Chiết mẫu: Bacitracin kẽm được chiết ra khỏi mẫu thử bằng hỗn hợp dung môi thích hợp (thường là hỗn hợp axit hóa để giải phóng bacitracin khỏi liên kết với kẽm và các thành phần nền mẫu).
• Lọc và làm sạch: Dịch chiết sau đó được lọc qua màng lọc chuyên dụng hoặc xử lý qua cột chiết pha rắn (SPE) nếu cần thiết để loại bỏ các tạp chất có thể gây ảnh hưởng đến quá trình phân tích sắc ký.
• Phân tích sắc ký: Hàm lượng bacitracin kẽm được xác định bằng hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) sử dụng cột pha đảo (reversed-phase column) và đầu dò tử ngoại (UV detector) ở bước sóng thích hợp (thường là khoảng 254 nm).
• Định lượng: Việc định lượng được thực hiện bằng phương pháp ngoại chuẩn, so sánh diện tích pic hoặc chiều cao pic của mẫu thử với pic của dung dịch chuẩn bacitracin kẽm có nồng độ đã biết.

- Điều 4: Thuốc thử và vật liệu thử

• Yêu cầu chung: Chỉ sử dụng các thuốc thử có cấp độ tinh khiết phân tích và nước dùng cho HPLC (nước cất hai lần hoặc nước có độ tinh khiết tương đương).
• Chất chuẩn: Bacitracin kẽm chuẩn có hoạt độ đã biết rõ, được bảo quản trong điều kiện lạnh và tránh ánh sáng để đảm bảo tính ổn định.
• Dung môi chiết và pha động: Bao gồm các hóa chất như metanol, axetonitril, axit photphoric, nước cất siêu sạch, và các muối đệm photphat được pha chế theo tỷ lệ quy định để làm pha động cho hệ thống HPLC.
• Dung dịch chuẩn gốc và dung dịch chuẩn làm việc: Hướng dẫn chi tiết cách cân, hòa tan và pha loãng chất chuẩn bacitracin kẽm để tạo ra dãy chuẩn phục vụ cho việc dựng đường chuẩn định lượng.