Giới thiệu chung về Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8903:2011

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8903:2011 hoàn toàn tương đương với tiêu chuẩn châu Âu EN 1139:1994. Tiêu chuẩn này quy định phương pháp enzym sử dụng phép đo phổ NADPH để xác định chính xác hàm lượng axit D-isocitric có trong nước rau, quả và các sản phẩm tương tự. Dưới đây là tóm tắt chi tiết nội dung từ Điều 1 đến Điều 4 của tiêu chuẩn này.

Điều 1: Phạm vi áp dụng

Điều khoản này xác định rõ giới hạn và đối tượng áp dụng của phương pháp phân tích:

• Phương pháp này được áp dụng để định lượng axit D-isocitric trong các loại nước quả, nước rau, nước quả cô đặc và các sản phẩm liên quan.
• Việc xác định hàm lượng axit D-isocitric đóng vai trò quan trọng trong việc đánh giá chất lượng, độ nguyên chất và phát hiện các hành vi gian lận thương mại (như việc pha loãng hoặc bổ sung các chất không tự nhiên) trong các sản phẩm nước trái cây.

Điều 2: Tài liệu viện dẫn

Để áp dụng tiêu chuẩn này một cách chính xác, việc viện dẫn các tài liệu kỹ thuật sau đây là bắt buộc:

• Các tài liệu viện dẫn bao gồm các tiêu chuẩn về lấy mẫu, chuẩn bị mẫu thử và các yêu cầu chung đối với nước dùng trong phòng thử nghiệm phân tích.
• Đối với các tài liệu viện dẫn ghi rõ năm công bố thì áp dụng bản được nêu. Đối với các tài liệu viện dẫn không ghi năm công bố thì áp dụng phiên bản mới nhất, bao gồm cả các sửa đổi, bổ sung (nếu có).

Điều 3: Nguyên tắc của phương pháp

Nguyên tắc hóa sinh của phương pháp đo phổ enzym được mô tả chi tiết như sau:

• Axit D-isocitric có trong mẫu thử được oxy hóa bởi nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADP) dưới sự xúc tác của enzym isocitrate dehydrogenase (ICDH) để tạo thành alpha-ketoglutarate, carbon dioxide (CO2) và NADPH (nicotinamide adenine dinucleotide phosphate dạng khử).
• Phản ứng hóa sinh này diễn ra theo tỷ lệ mol 1:1, nghĩa là lượng NADPH được tạo thành tương đương với lượng axit D-isocitric ban đầu có trong mẫu.
• Lượng NADPH sinh ra được xác định bằng cách đo độ hấp thụ quang phổ (độ mật độ quang) ở bước sóng 340 nm. Ngoài ra, cũng có thể đo ở các bước sóng thứ cấp như 334 nm hoặc 365 nm tùy thuộc vào thiết bị đo phổ của phòng thí nghiệm.

Điều 4: Thuốc thử và các chất chuẩn bị

Yêu cầu về chất lượng hóa chất và cách chuẩn bị các dung dịch phản ứng phục vụ cho quá trình phân tích:

• Yêu cầu chung: Chỉ sử dụng các thuốc thử có cấp độ tinh khiết phân tích và nước được sử dụng phải là nước cất hoặc nước có độ tinh khiết tương đương (phù hợp với tiêu chuẩn nước dùng cho phân tích phòng thí nghiệm).
• Dung dịch đệm: Thường sử dụng đệm imidazole-HCl hoặc đệm thích hợp khác để duy trì độ pH tối ưu (khoảng pH từ 7,0 đến 7,5) cho hoạt động xúc tác của enzym ICDH.
• Coenzym NADP: Dung dịch nicotinamide adenine dinucleotide phosphate được chuẩn bị với nồng độ chính xác để đảm bảo phản ứng oxy hóa xảy ra hoàn toàn.
• Dung dịch enzym ICDH: Enzym isocitrate dehydrogenase từ nguồn thích hợp (như nấm men hoặc tim lợn) có hoạt độ enzym đủ cao để thúc đẩy phản ứng nhanh chóng và triệt để.
• Dung dịch chuẩn axit D-isocitric: Được sử dụng để kiểm tra hiệu năng của hệ thống đo và xây dựng đường chuẩn nhằm đảm bảo tính chính xác của kết quả phân tích.