TIÊU CHUẨN QUỐC GIA

TCVN 9127:2011

THỨC ĂN CHĂN NUÔI - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG FURAZOLIDON - PHƯƠNG PHÁP SỬ DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO

Animal feeding stuffs - Determination of furazolidone content - Method using high-performance liquid chromatography

1. Phạm vi áp dụng

Tiêu chuẩn này quy định phương pháp sử dụng sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) để xác định hàm lượng furazolidon của các premix và thức ăn chăn nuôi.

Phương pháp này có thể áp dụng cho các loại thức ăn chăn nuôi có chứa hàm lượng furazolidon từ 25 mg/kg đến 5 000 mg/kg và các loại premix có chứa furazolidon lên đến 20 % khối lượng.

CHÚ THÍCH 1: Đối với thức ăn chăn nuôi, hàm lượng furazolidon được biểu thị bằng miligam trên kilogam; đối với các premix, tính bằng phần trăm khối lượng [% (m/m)].

CHÚ THÍCH 2: Furazolidon là một chất hóa học trị liệu thuộc nhóm nitrofuran. Nitrofuran là chất kháng khuẩn hoặc diệt vi khuẩn kháng các loại vi sinh vật Gram dương, Gram âm và kháng một số nấm mốc và động vật nguyên sinh (protozoa).

2. Tài liệu viện dẫn

Các tài liệu viện dẫn sau là rất cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn. Đối với các tài liệu viện dẫn ghi năm công bố thì áp dụng phiên bản được nêu. Đối với các tài liệu viện dẫn không ghi năm công bố thì áp dụng phiên bản mới nhất, bao gồm cả các sửa đổi, bổ sung (nếu có).

TCVN 6952:2001 (ISO 6498:1998), Thức ăn chăn nuôi - Chuẩn bị mẫu thử.

3. Nguyên tắc

Furazolidon được chiết ra khỏi mẫu bằng hỗn hợp của axetonitril và metanol. Mẫu được làm ẩm sơ bộ bằng nước. Dịch chiết của mẫu được tinh sạch qua cột nhôm oxit ngắn và sau đó pha loãng bằng nước. Dịch chiết của premix được pha loãng trực tiếp bằng hỗn hợp của nước, axetonitril và metanol. Dịch chiết cuối cùng được phân tích bằng HPLC pha đảo với detector UV ở bước sóng 365 nm (xem Tài liệu tham khảo [1] đến [3]).

4. Thuốc thử

Chỉ sử dụng các thuốc thử loại tinh khiết phân tích, trừ khi có các quy định khác.

4.1. Nước, đã khử khoáng hoặc đã khử ion, có điện trở ít nhất 10 MΩ.cm. hoặc nước ít nhất có độ tinh khiết tương đương.

4.2. Dung môi chiết: hỗn hợp của axetonitril và metanol tỷ lệ 1:1 (thể tích)

Trộn các thể tích bằng nhau của axetonitril và metanol. Trộn kỹ và đến nhiệt độ phòng trước khi sử dụng.

4.3. Dung môi loãng: hỗn hợp của dung môi chiết (4.2) và nước (4.1) tỷ lệ 35:65 (thể tích).

Trộn 350 ml dung môi chiết (4.2) với 650 ml nước (4.1).

4.4. Axit axetic (CH₃CO₂H), 10 % thể tích [10 % (thể tích)].

Pha loãng 10 ml axit axetic băng bằng nước (4.1) đến 100 ml.

4.5. Dung dịch đệm natri axetat, c(CH₃CO₂Na) = 0,01 mol/l, pH = 6,0.

Cân 0,82 g natri axetat vào bình định mức 1 000 ml. Pha loãng trong 700 ml nước. Chỉ pH đến 6 bằng axit axetic (4.4). Pha loãng đến vạch bằng nước và trộn.

4.6. Pha động dùng cho HPLC

Trộn đều 800 ml dung dịch đệm natri axetat (4.5) với 200 ml axetonitril. Lọc dung môi rửa giải qua bộ lọc cỡ lỗ 0,22 mm dùng hệ thống lọc dung môi (5.2) và khử khí 10 min trong bể siêu âm (5.3) trước khi sử dụng.

4.7. Chất chuẩn furazolidon: N-(5-nitro-2-furfuryliden)-3-amino-2-oxazolidon, số CAS 67-45-8  theo số đăng ký hóa chất quốc tế.

CẢNH BÁO - Do furazolidon nhạy với ánh sáng nên cần tiến hành các thao tác tránh ánh sáng ban ngày hoặc ánh sáng trắng nhân tạo. Tránh hít và tiếp xúc với chất chuẩn furazolidon cũng như các dung dịch của chúng. Làm việc trong tủ hốt khi xử lý các dung môi và dung dịch. Đeo kính an toàn và mặc quần áo bảo vệ.

4.8. Dung dịch gốc furazolidon (khoảng 250 mg/ml).

Cân 25 mg ± 1 mg furazolidon (4.7), chính xác đến 0,1 mg vào bình định mức một vạch 100 ml. Hòa tan trong dung m