Giới thiệu chung về Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8881:2011 (ISO 16266:2006)

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8881:2011 hoàn toàn tương đương với tiêu chuẩn quốc tế ISO 16266:2006, quy định phương pháp phát hiện và đếm vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa trong nước bằng phương pháp màng lọc. Đây là tiêu chuẩn kỹ thuật quan trọng áp dụng cho việc kiểm soát chất lượng nước, đặc biệt là nước đóng chai, nước khoáng thiên nhiên, nước hồ bơi và các loại nước tiêu dùng khác. Dưới đây là tóm tắt chi tiết nội dung từ Điều 1 đến Điều 4 của tiêu chuẩn này.

Điều 1: Phạm vi áp dụng

Điều khoản này xác định rõ giới hạn và đối tượng áp dụng của phương pháp thử nghiệm:

• Phương pháp này được thiết kế cụ thể để phát hiện và đếm số lượng vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa có trong các mẫu nước đóng chai, nước khoáng thiên nhiên, nước dùng cho sinh hoạt và nước tại các bể bơi.
• Tiêu chuẩn cũng có thể áp dụng cho các loại nước khác có lượng hạt lơ lửng thấp, đảm bảo không làm tắc nghẽn màng lọc trong quá trình tiến hành thử nghiệm.
• Phương pháp màng lọc đặc biệt phù hợp khi cần kiểm tra thể tích mẫu nước lớn với mật độ vi khuẩn dự kiến thấp, giúp tăng độ chính xác và độ nhạy của phép đo.

Điều 2: Tài liệu viện dẫn

Để áp dụng tiêu chuẩn này một cách chính xác, cần viện dẫn và kết hợp với các tài liệu tiêu chuẩn quốc tế và quốc gia sau:

• TCVN 6404 (ISO 7218) về Nguyên tắc chung trong kiểm tra vi sinh vật.
• ISO 8199 về Chất lượng nước - Hướng dẫn chung về đếm vi sinh vật bằng phương pháp nuôi cấy.
• ISO 3696 về Nước dùng cho phân tích phòng thí nghiệm - Yêu cầu kỹ thuật và phương pháp thử.
• Các tài liệu viện dẫn này là bắt buộc và phải áp dụng phiên bản mới nhất được cập nhật tại thời điểm thực hiện thử nghiệm.

Điều 3: Thuật ngữ và định nghĩa

Tiêu chuẩn đưa ra định nghĩa khoa học và thực tiễn về Pseudomonas aeruginosa để làm cơ sở cho việc nhận diện trong phòng thí nghiệm:

• Pseudomonas aeruginosa được định nghĩa là những vi sinh vật có khả năng sinh trưởng trên môi trường chọn lọc chứa cetrimid và nalidixic acid (môi trường CN agar).
• Chúng có đặc điểm sinh huỳnh quang dưới ánh sáng tử ngoại (UV) ở bước sóng (360 ± 20) nm hoặc có khả năng sinh sắc tố pyocyanin màu xanh lá cây/xanh dương đặc trưng.
• Các chủng vi khuẩn này cũng được xác định thông qua các phản ứng sinh hóa đặc trưng bao gồm: phản ứng oxidase dương tính, khả năng sinh amoniac từ acetamide, và khả năng khử nitrat thành nitơ tự do.

Điều 4: Nguyên tắc của phương pháp

Nguyên tắc cốt lõi của phương pháp màng lọc được quy định chi tiết qua các bước kỹ thuật tiêu chuẩn:

• Lọc mẫu nước: Một thể tích mẫu nước xác định (thường là 100 ml hoặc lớn hơn tùy thuộc vào loại nước) được lọc qua một màng lọc có kích thước lỗ danh định là 0,45 µm để giữ lại toàn bộ vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa có trong mẫu.
• Nuôi cấy chọn lọc: Màng lọc sau khi lọc được đặt trực tiếp lên bề mặt của đĩa môi trường CN agar (môi trường thạch chọn lọc chứa cetrimid và nalidixic acid nhằm ức chế các vi sinh vật không mong muốn khác).
• Ủ ấm: Các đĩa môi trường được tiến hành ủ ở nhiệt độ ổn định (36 ± 2) độ C trong khoảng thời gian từ (44 ± 4) giờ.
• Kiểm tra và đếm khuẩn lạc: Sau thời gian ủ, tiến hành kiểm tra các khuẩn lạc phát triển trên màng lọc dưới ánh sáng thường và ánh sáng tử ngoại để phát hiện các khuẩn lạc sinh pyocyanin hoặc sinh huỳnh quang.
• Xác nhận sinh hóa: Tiến hành các thử nghiệm khẳng định đối với các khuẩn lạc nghi ngờ bằng phản ứng oxidase, thử nghiệm trên môi trường acetamide và các phản ứng sinh hóa bổ trợ khác để đưa ra kết luận cuối cùng về sự hiện diện và số lượng của Pseudomonas aeruginosa.