TIÊU CHUẨN VIỆT NAM

TCVN 6189-1:1996

CHẤT LƯỢNG NƯỚC - PHÁT HIỆN VÀ ĐẾM LIÊN CẦU PHÂN - PHẦN 1: PHƯƠNG PHÁP TĂNG SINH TRONG MÔI TRƯỜNG CẤY LỎNG

Water quality – Detection and enumeration of faecal streptococci - Part 1: Method by enrichment in a liquid medium

1. Phạm vi áp dụng

Tiêu chuẩn này quy định phương pháp chuẩn để phát hiện và đếm liên cầu phân trong nước bằng cách tăng sinh trong môi trường cấy lỏng.

2. Lĩnh vực áp dụng

Phương pháp này có thể áp dụng được đối với mọi loại nước, kể cả nước đục.

3. Tiêu chuẩn trích dẫn

ISO 5667 Chất lượng nước - Lấy mẫu - Phần 1: Hướng dẫn các phương án lấy mẫu.

TCVN 5992 : 1995 (ISO 5662 – 2) Chất lượng nước - Lấy mẫu - Hướng dẫn các kỹ thuật lấy mẫu.

TCVN 5993 : 1995 (ISO 5662 – 3) Chất lượng nước - Lấy mẫu - Hướng dẫn vận chuyển và xử lý mẫu.

4. Định nghĩa

Liên cầu phân: Là các vi khuẩn cho phản ứng dương tính với các môi trường (6.2.1 và 6.2.2) được quy định trong tiêu chuẩn và cho phản ứng âm tính trong phép thử, catalaza.

5. Nguyên tắc và các phản ứng

Việc xác định liên cầu phân trong một thể tích xác định của một mẫu thử cần qua hai bước sau:

5.1. Nuôi cấy tăng sinh

Nuôi cấy mẫu thử trong môi trường lỏng chọn lọc canh thang glucoza - nitrua trong 44 ^h ± 4 ^h ở 35^oC hoặc 37^oC. Liên cầu phân sinh trưởng trong môi trường này và làm lên men glucoza kèm theo việc hình thành axit là nguyên nhân làm biến đổi màu của chỉ thị pH từ tía sang vàng.

5.2. Khẳng định.

Tất cả các ống tăng sinh cho phản ứng dương tính sau 24 ^h hoặc 48 ^h sẽ được nuôi cấy tiếp trên môi trường khẳng định để loại trừ các phản ứng dương tính giả như phản ứng của các loại trực khuẩn và cầu khuẩn Gram dương khác. Môi trường khẳng định, thạch mật - aesculin - nitrua, sau đó được nuôi cấy ở 44^oC trong 48 ^h. Liên cầu phân sinh trưởng trong môi trường này và thủy phân aesculin; sản phẩm cuối; 6,7-hidroxycoumarin kết hợp với ion Fe(III) để tạo thành một hợp chất màu nâu vàng tới đen khuyếch tán vào môi trường. Ngoài ra, tiến hành phép thử catalaza đối với các khuẩn lạc nghi ngờ trong môi trường khẳng định. Các khuẩn lạc cho phản ứng aesculin dương tính và catalaza âm tính có thể được xem là liên cầu phân.

6. Môi trường nuôi cấy và thuốc thử

Cảnh báo – Tất cả các môi trường chọn lọc được mô tả trong phần này của tiêu chuẩn đều chứa natri nitrua. Vì chất này cực độc và có tính gây đột biến, phải thận trọng để tránh tiếp xúc với nó, đặc biệt tránh hút phải các bụi nhỏ trong khi pha chế các môi trường hoàn chỉnh khô dạng thương phẩm. Các môi trường có chứa nitrua không được trộn lẫn với các axit vô cơ mạnh, vì có thể tạo ra chất hydro-nitrua (HN₃). Các dung dịch có chứa nitrua cũng có thể hình thành các chất gây nổ khi tiếp xúc với các ống dẫn bằng kim loại, ví dụ: các ống dẫn bằng kim loại trong các bồn rửa.

6.1. Các nguyên vật liệu cơ bản

Để cho các kết quả được đồng nhất, khi pha chế các môi trường cần sử dụng các thành phần cùng mức chất lượng và các hóa chất thuộc loại dùng cho phân tích, hoặc một môi trường hoàn chỉnh khô. Natri nitrua sẽ phân hủy theo thời gian, vì vậy các môi trường khô chỉ có một thời hạn sử dụng nhất định.

Chỉ sử dụng nước cất hoặc nước có độ tinh khiết tương đương.

6.2. Các môi trường nuôi cấy

6.2.1. Canh thang glucoza (nồng độ đơn)