Giới thiệu chung về Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 6685:2000 (ISO 14501 : 1998)

Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 6685:2000 hoàn toàn tương đương với tiêu chuẩn quốc tế ISO 14501:1998, quy định phương pháp xác định hàm lượng aflatoxin M1 trong sữa và sữa bột. Phương pháp này sử dụng kỹ thuật làm sạch bằng cột sắc ký miễn dịch chọn lọc (immunoaffinity chromatography) và định lượng bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) kết hợp với đầu dò huỳnh quang. Dưới đây là tóm tắt chi tiết nội dung từ Điều 1 đến Điều 4 của tiêu chuẩn này.

Điều 1: Phạm vi áp dụng

Tiêu chuẩn này quy định phương pháp xác định hàm lượng aflatoxin M1 trong các đối tượng sản phẩm cụ thể bao gồm:

• Sữa bột nguyên kem, sữa bột tách béo một phần và sữa bột gầy.
• Sữa tươi, sữa dạng lỏng nguyên kem, sữa tách béo một phần và sữa gầy.
• Giới hạn phát hiện tối thiểu của phương pháp này đối với sữa bột là 0,05 microgam trên kilogam (0,05 mcg/kg) dựa trên khối lượng bột khô, và đối với sữa lỏng là 0,005 microgam trên lít (0,005 mcg/l).
• Phương pháp này cũng có thể áp dụng cho sữa có chứa chất bảo quản (như natri azit) với điều kiện chất bảo quản không làm ảnh hưởng đến hiệu suất liên kết của cột sắc ký miễn dịch.

Điều 2: Tiêu chuẩn viện dẫn

Để áp dụng tiêu chuẩn này một cách chính xác, cần viện dẫn tài liệu kỹ thuật sau:

• TCVN 6400 (ISO 707) Sữa và sản phẩm sữa - Hướng dẫn lấy mẫu. Các tài liệu viện dẫn này là bắt buộc và phải áp dụng phiên bản mới nhất được công bố.

Điều 3: Nguyên tắc của phương pháp

Quy trình phân tích hàm lượng aflatoxin M1 dựa trên các nguyên tắc kỹ thuật nghiêm ngặt sau:

• Hấp phụ và làm sạch: Aflatoxin M1 có trong dung dịch mẫu thử (được chuẩn bị từ sữa lỏng hoặc sữa bột hoàn nguyên) được cô đặc và làm sạch bằng cách cho đi qua cột sắc ký miễn dịch chọn lọc có chứa kháng thể đơn dòng đặc hiệu chống lại aflatoxin M1.
• Rửa giải: Sau khi các tạp chất khác bị rửa trôi bằng nước cất hoặc dung dịch đệm thích hợp, aflatoxin M1 liên kết trên cột sẽ được giải hấp phụ (rửa giải) bằng dung dịch axetonitril hoặc metanol tinh khiết.
• Định lượng bằng HPLC: Dịch rửa giải thu được sẽ được cô đặc (nếu cần) và tiến hành phân tích định lượng bằng hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) sử dụng cột pha đảo, kết hợp với đầu dò huỳnh quang để đo cường độ phát xạ của aflatoxin M1.

Điều 4: Thuốc thử và vật liệu thử

Tiêu chuẩn yêu cầu sử dụng các loại thuốc thử có độ tinh khiết phân tích cao để đảm bảo độ chính xác của phép đo:

• Nước cất hoặc nước có độ tinh khiết tương đương: Sử dụng nước đã được khử ion hoặc chưng cất hai lần, không chứa các tạp chất hữu cơ gây nhiễu tín hiệu sắc ký.
• Dung môi hữu cơ: Axetonitril và metanol phải là loại dùng cho sắc ký lỏng (HPLC grade).
• Cột sắc ký miễn dịch chọn lọc: Cột phải chứa các kháng thể đặc hiệu với aflatoxin M1, có khả năng liên kết tối thiểu không dưới 100 ng aflatoxin M1 và đạt hiệu suất thu hồi tối thiểu là 80% khi áp dụng với dung dịch chuẩn.
• Dung dịch chuẩn aflatoxin M1: Được chuẩn bị từ chất chuẩn gốc tinh khiết, bảo quản ở nhiệt độ lạnh dưới 4 độ C và tránh ánh sáng trực tiếp để ngăn ngừa sự phân hủy quang học của độc tố.
• Khí nitơ: Sử dụng khí nitơ tinh khiết cao để thổi khô dung môi trong quá trình cô đặc mẫu.