TIÊU CHUẨN QUỐC GIA

TCVN 9636 : 2013

ISO 8870 : 2006

SỮA VÀ SẢN PHẨM SỮA – PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN THERMONUCLEASE TẠO THÀNH DO STAPHYLOCOCCI DƯƠNG TÍNH VỚI COAGULASE

Milk and milk-based products – Detection of thermononuclease produced by coagulase-positive staphylococci

Lời nói đầu

TCVN 9636:2013 hoàn toàn tương đương ISO 8870:2006/IDF 83:2006;

TCVN 9636:2013 do Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F13 Phương pháp phân tích và lấy mẫu biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học và Công nghệ công bố.

SỮA VÀ SẢN PHẨM SỮA – PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN THERMONUCLEASE TẠO THÀNH DO STAPHYLOCOCCI DƯƠNG TÍNH VỚI COAGULASE

Milk and milk-based products – Detection of thermononuclease produced by coagulase-positive staphylococci

1. Phạm vi áp dụng

Tiêu chuẩn này quy định phương pháp phát hiện DNase bền nhiệt (thermonuclease) tạo thành do staphylococci dương tính với coagulase trong sữa và sản phẩm sữa.

Có thể dùng enzym để làm chỉ thị về sự phát triển của tụ cầu khuẩn đã đạt đến mức gây hại và có thể phát hiện khả năng có mặt các độc tố đường ruột của tụ cầu khuẩn (staphylococcal enterotoxins).

2. Tài liệu viện dẫn

Các tài liệu viện dẫn sau rất cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn này. Đối với các tài liệu viện dẫn ghi năm công bố thì áp dụng phiên bản được nêu. Đối với các tài liệu viện dẫn không ghi năm công bố thì áp dụng phiên bản mới nhất, bao gồm cả các sửa đổi, bổ sung (nếu có).

TCVN 6263 (ISO 8261) *), Sữa và sản phẩm sữa – Hướng dẫn chung về chuẩn bị mẫu thử, huyền phù ban đầu và dung dịch pha loãng thập phân để kiểm tra vi sinh vật

3. Thuật ngữ và định nghĩa

Trong tiêu chuẩn này áp dụng thuật ngữ và định nghĩa sau đây:

3.1. DNase bền nhiệt (thermonuclease)

Enzym tạo thành bởi staphylococci dương tính với coagulase, thủy phân axit deoxyribonucleic (ADN) với các điều kiện quy định trong tiêu chuẩn này.

4. Nguyên tắc

Sữa, sữa bột hoàn nguyên hoặc các sản phẩm sữa đã đồng hóa sau khi bổ sung sữa bột gầy, được chỉnh đến pH 3,8 và ly tâm. Phần nổi phía trên được làm kết tủa với axit tricloaxetic. Sau khi ly tâm, chỉnh pH của phần kết tủa đến pH 8,5 rồi bổ sung dung dịch đệm Tris. Sau đó làm nóng dung dịch 15 min trong nồi cách thủy đun sôi và kiểm tra hoạt độ của thermonuclease trong thạch toluidine blue O-DNA. Màu của thạch sẽ chuyển từ xanh sang hồng nếu thermonuclease tách phân tử ADN. Phản ứng màu này là do tính chất đổi màu của toluidine blue O.

5. Môi trường cấy và thuốc thử

5.1. Nguyên liệu cơ bản

Đối với thực hành trong phòng thử nghiệm, xem TCVN 6263 (ISO 8261).

Chỉ sử dụng các thuốc thử loại tinh khiết phân tích và nước cất hoặc nước đã loại khoáng hoặc nước có chất lượng tương đương, trừ khi có quy định khác.

Nếu môi trường và thuốc thử đã được chuẩn bị trước mà chưa sử dụng ngay thì bảo quản ở nơi tối, với nhiệt độ từ 0 °C đến 5 °C không quá 1 tháng, trong các điều kiện không làm thay đổi thành phần của chúng, trừ khi có quy định khác.

5.2. Thạch toluidine blue O-DNA

5.2.1. Dung dịch đệm Tris

5.2.1.1. Thành phần