Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 7257:2003 quy định phương pháp xác định hàm lượng nitrat tổng số và nitrit tổng số trong thuốc lá và các sản phẩm thuốc lá. Dưới đây là tóm tắt chi tiết nội dung Phần mở đầu và các điều khoản đầu tiên từ Điều 1 đến Điều 4 của tiêu chuẩn này, giúp các tổ chức, cá nhân hoạt động trong lĩnh vực sản xuất, kiểm nghiệm thuốc lá nắm rõ các yêu cầu kỹ thuật cốt lõi.

- Phạm vi áp dụng (Điều 1)

• Tiêu chuẩn này quy định phương pháp xác định hàm lượng nitrat tổng số và nitrit tổng số trong thuốc lá và các sản phẩm thuốc lá bằng phương pháp phân tích dòng liên tục.
• Phương pháp này áp dụng cho cả thuốc lá nguyên liệu và các loại sản phẩm thuốc lá thành phẩm (như thuốc lá điếu, thuốc lá sợi, thuốc lào).
• Việc xác định chính xác hàm lượng nitrat và nitrit đóng vai trò quan trọng trong việc kiểm soát chất lượng nguyên liệu và đánh giá các chỉ tiêu an toàn vệ sinh của sản phẩm thuốc lá trước khi lưu thông trên thị trường.

- Tài liệu viện dẫn (Điều 2)

• Các tài liệu viện dẫn sau đây là rất cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn này. Đối với các tài liệu viện dẫn ghi năm công bố thì áp dụng bản được nêu. Đối với các tài liệu viện dẫn không ghi năm công bố thì áp dụng phiên bản mới nhất, bao gồm cả các sửa đổi (nếu có).
• TCVN 5078 (ISO 3402) về Thuốc lá và sản phẩm thuốc lá - Không khí để điều hòa và thử nghiệm. Đây là tiêu chuẩn bắt buộc để đảm bảo mẫu thử được chuẩn bị trong điều kiện môi trường đồng nhất và chuẩn xác.

- Nguyên tắc của phương pháp (Điều 3)

• Quá trình xác định dựa trên nguyên tắc chiết xuất nitrat và nitrit từ mẫu thuốc lá bằng nước cất hoặc dung dịch chiết thích hợp.
• Sau khi chiết xuất, nitrat có trong dung dịch chiết được khử thành nitrit bằng cách cho đi qua cột khử chứa cadmium đã được hoạt hóa (hoặc tác nhân khử tương đương phù hợp với hệ thống phân tích dòng liên tục).
• Nitrit tổng số (bao gồm nitrit ban đầu và nitrat đã được khử thành nitrit) được cho phản ứng với sulfanilamid trong môi trường axit để tạo thành muối diazoni.
• Muối diazoni tiếp tục phản ứng kết hợp với N-(1-naphthyl)ethylendiamin dihydroclorua (NED) để tạo thành hợp chất màu azo có màu đỏ tím đặc trưng.
• Cường độ màu của phức chất được đo bằng phương pháp quang phổ tại bước sóng cực đại thích hợp (thường là khoảng 540 nm) bằng hệ thống phân tích dòng liên tục để tính toán ra hàm lượng nitrat và nitrit tổng số dựa trên đường chuẩn.

- Thuốc thử và vật liệu thử nghiệm (Điều 4)

• Tất cả các hóa chất được sử dụng trong quá trình phân tích phải là loại tinh khiết phân tích (AR) và nước dùng để pha chế phải là nước cất hoặc nước có độ tinh khiết tương đương.
• Dung dịch chiết: Nước cất hoặc dung dịch đệm thích hợp để đảm bảo hiệu suất chiết xuất tối ưu mà không làm phân hủy các hợp chất cần phân tích.
• Các hóa chất phục vụ phản ứng tạo màu: Bao gồm dung dịch sulfanilamid, dung dịch N-(1-naphthyl)ethylendiamin dihydroclorua (NED) và axit clohydric để điều chỉnh môi trường phản ứng.
• Chất chuẩn nitrat và nitrit: Sử dụng kali nitrat (KNO3) và natri nitrit (NaNO2) sấy khô để pha chế các dung dịch tiêu chuẩn gốc và các dung dịch làm việc dùng cho việc xây dựng đường chuẩn đồ thị.
• Tác nhân khử: Cadmium dạng hạt hoặc dạng sợi được xử lý bằng dung dịch đồng sulfat để hoạt hóa, phục vụ cho việc nạp vào cột khử nitrat.