TIÊU CHUẨN VIỆT NAM

TCVN 5518-1991

THỰC PHẨM - PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN VÀ XÁC ĐỊNH SỐ VI KHUẨN HỌ ENTEROBACTERIACEAE

Foodstuffs - Methods for the detection and enumeration of enterobacteriaceae

LỜI NÓI ĐẦU

TCVN 5518-1991 phù hợp với ST SEV 6076-87

PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN VÀ XÁC ĐỊNH SỐ VI KHUẨN HỌ ENTEROBACTERIACEAE

Foodstuffs - Methods for the detection and enumeration of enterobacteriaceae

Tiêu chuẩn này quy định những phương pháp phát hiện và xác định số vi khuẩn họ Enterobacteriaceae có trong thực phẩm. Tiêu chuẩn này phù hợp với ST SEV 6076-87.

1. ĐỊNH NGHĨA

Vi khuẩn họ Enterobacteriaceae là vi khuẩn hình que, gram âm, lên men glucoza và tạo phản ứng oxydazơ âm tính.

2. QUI ĐỊNH CHUNG

Khi có số lượng vi khuẩn Enterobacteriaceae ít hơn 15 trong 1 cm³ và nhiều hơn 3 trong 100 cm³ mẫu thử lỏng, hay là ít hơn 150 trong 1 gan và nhiều hơn 3 trong 10 gam mẫu thử ở trạng thái khác thí áp dụng phương pháp xác định số có xác suất lớn nhất. Khi số lượng vi khuẩn họ Enterobacteriaceae, lớn hơn 15 trong 1 cm³ mẫu thử lỏng hoặc nhiều hơn 150 trong 1 gam mẫu thử đặc, thì áp dụng phương pháp cấy vào môi trường aga trong hộp petri. Khi phát hiện bọ Enterobacteriaceae trong một lượng mẫu nhất định áp dụng phương pháp tăng sinh sơ bộ.

3. NỘI DUNG CỦA PHƯƠNG PHÁP

3.1. Phương pháp xác định số có xác suất lớn nhất dựa trên cơ sở cấy sản phẩm và các đậm độ pha loãng của chúng trong các ống nghiệm có môi trường lỏng chọn lọc, ủ ấm ở điều kiện hiếu khí ở 37 ± 1^oC trong 24 ± 3 giờ.

3.2. Phương pháp xác định số lượng vi khuẩn, trong môi trường đặc dựa trên việc cấy thực phẩm hoặc các đậm độ pha loãng của chúng vào môi trường thạch chẩn đoán chọn lọc, ủ ấm ở 37 ± 1^oC trong 24 giờ.

3.3. Phương pháp phát hiện vi khuẩn dựa trên việc cấy một lượng sản phẩm thực phẩm xác định trong ống nghiệm có môi trường lỏng không chọn lọc, tăng sinh sơ bộ, ủ ấm ở 37 ± 1^oC trong 18 ± 2 giờ, cấy truyền sang môi trường lỏng phân lập và cấy truyền tiếp trên bề mặt môi trường aga chẩn đoán chọn lọc có glucoza.

4. MẪU THỬ

4.1. Mẫu thử được lấy và chuẩn bị kiểm nghiệm theo TCVN 4886-89 (ST SEV 3013-14) và 4887-89 (ST SEV 3014-81).

4.2. Khối lượng (thể tích) của mẫu kiểm nghiệm dùng để chuẩn bị dung dịch pha loãng ban đầu không được ít hơn 10,0 ± 0,1 g( cm³). Nếu cấy trực tiếp vào môi trường aga chẩn đoán thì lấy 1,0 cm³ mẫu lỏng hoặc 1,0 cm³ huyền dịch gốc (mẫu ở dạng khác). Nếu cấy vào môi trường lỏng không chọn lọc để tăng sinh sơ bộ thì lấy không ít hơn 1g (cm³) mẫu thử.

5. DỤNG CỤ VÀ THIẾT BỊ

Để tiến hành kiểm nghiệm mẫu dùng những dụng cụ và thiết bị theo TCVN 4887-89 (ST SEV 3014-89) và thêm:

1- Cân thí nghiệm;

2- Nồi hấp;

3- Bếp cách thủy;

4- pH mét với độ chính xác ± 0,1;

5- Tủ ấm ở 37 ± 1^oC;

6- Hộp petri có đường kính trong lò 90 ± 2 mm hoặc 100 ± 2 mm;

7- Ống nghiệm có kích thước (16x160) mm và (20x20) mm

8- Pipét 1 cm³ và 10 cm³.

9- Que cấy;

10- Que cấy có đầu bằng platin hoặc là đũa thủy tinh;

11- Kim cấy

6. THUỐC THỬ, DUNG DỊCH, MÔI TRƯỜNG DINH DƯỠNG

Để tiến hành kiểm nghiệm cần có:

1- Pepton;

2- Tropton hoặc dịch thủy ngân casein bằng men;

3- Chiết thịt (cao thịt)

4- Chiết nấm men khô (cao men)

5- Natriclorua (NaCl)

6- Glucoza

7- Kalidihyđrophotphat (KH₂PO₄)

8- Dinatrihyđrophotphat khan (Na₂HPO₄)

9- Dinatri hyđrophotphat ngậm 12 phân tử nước (Na₂HPO₄.12H₂O)

10- Muối mật số 3 (Natritorocolat)

11- Mật bò khô

12- Aga

13- Tím tinh thể, dung dịch 1% va 0,1% pha chế như sau: 1,0g bột thuốc nhuộm, hòa tan trong 80 cm³ nước cất đã đun nóng tới 60^oC, khuấy liên tục trong ống đong có nút mài. Sau khi làm nguội định mức trong bình định mức đến 100 cm³. Từ dung dịch gốc đó pha loãng thêm bằng nước cất với tỷ lệ 1 : 9 đối với môi trường mục 6.20, cả hai loại dung dịch đó