Giới thiệu chung về Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 11396:2016

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 11396:2016 quy định quy trình phát hiện và định danh vi khuẩn Vibrio vulnificus trong thực phẩm. Phương pháp này sử dụng kỹ thuật sắc ký khí để phân tích và nhận biết cấu trúc axit béo đặc trưng của vi khuẩn, mang lại độ chính xác cao trong công tác kiểm nghiệm an toàn thực phẩm.

Nội dung chi tiết Phần mở đầu và các điều khoản đầu (Từ Điều 1 đến Điều 4)

Điều 1: Phạm vi áp dụng

• Tiêu chuẩn này hướng dẫn phương pháp phát hiện và xác định sự hiện diện của vi khuẩn Vibrio vulnificus trong các loại thực phẩm, thủy sản, hải sản và các mẫu môi trường liên quan đến chuỗi sản xuất thực phẩm.
• Phương pháp nhận biết axit béo bằng kỹ thuật sắc ký khí áp dụng cho các chủng vi khuẩn đã được phân lập từ các môi trường nuôi cấy chọn lọc.

Điều 2: Tài liệu viện dẫn

• Tiêu chuẩn này áp dụng các tài liệu viện dẫn cốt lõi về vi sinh vật học thực phẩm và thức ăn chăn nuôi.
• Đối với các tài liệu viện dẫn có ghi năm công bố, các phiên bản được nêu sẽ được áp dụng. Đối với các tài liệu không ghi năm công bố, phiên bản mới nhất (bao gồm cả các sửa đổi, bổ sung) sẽ được sử dụng làm căn cứ pháp lý và kỹ thuật.

Điều 3: Thuật ngữ và định nghĩa

Tiêu chuẩn đưa ra các định nghĩa chuyên ngành quan trọng nhằm thống nhất cách hiểu và thực hiện:

• Vibrio vulnificus: Là loài vi khuẩn gram âm, hình que cong, ưa mặn, có khả năng gây bệnh nghiêm trọng cho con người qua đường tiêu hóa hoặc tiếp xúc trực tiếp.
• Hồ sơ axit béo (Fatty Acid Profile): Là thành phần và tỷ lệ phần trăm của các axit béo đặc trưng cấu tạo nên màng tế bào vi khuẩn, được sử dụng làm "dấu vân tay" hóa học để định danh loài.

Điều 4: Nguyên tắc của phương pháp

Quy trình nhận biết Vibrio vulnificus bằng kỹ thuật sắc ký khí dựa trên các bước nguyên tắc sau:

• Nuôi cấy và thu hoạch: Vi khuẩn nghi ngờ được nuôi cấy trên môi trường thạch tiêu chuẩn để thu được sinh khối tế bào đồng nhất ở giai đoạn phát triển tối ưu.
• Saponin hóa (Xà phòng hóa): Giải phóng các axit béo từ lipid màng tế bào vi khuẩn bằng dung dịch kiềm ở nhiệt độ cao.
• Este hóa (Dẫn xuất hóa): Chuyển đổi các axit béo tự do thành các metyl este của axit béo (FAME) để tăng tính bay hơi, phù hợp cho phân tích sắc ký khí.
• Chiết tách: Sử dụng dung môi hữu cơ để tách các hợp chất FAME ra khỏi hỗn hợp phản ứng.
• Làm sạch: Loại bỏ các tạp chất hữu cơ và nước còn sót lại trong dịch chiết trước khi tiến hành phân tích.
• Phân tích sắc ký khí (GC): Bơm mẫu FAME vào hệ thống sắc ký khí để phân tách các thành phần dựa trên thời gian lưu trên cột sắc ký.
• Định danh: So sánh phổ axit béo thu được với cơ sở dữ liệu chuẩn của hệ thống để xác định chính xác có phải là Vibrio vulnificus hay không.