TIÊU CHUẨN NGÀNH

10 TCN 298:1997

PHÂN VI SINH VẬT

PHÂN GIẢI HỢP CHẤT PHOT PHO KHÓ TAN

Phương pháp định lượng hoạt tính phân giải

1. Phạm vi áp dụng:

Tiêu chuẩn này hướng dẫn phương pháp định lượng khả năng phân giải hợp chất phot pho khó tan của chủng vi sinh vật hay phân bón vi sinh vật phân giải lân.

2. Nội dung của phương pháp

2.1. Thiết bị dụng cụ hoá chất:

- Thiết bị khử trùng: nồi hấp khử trùng, tủ sấy

- Thiết bị nuôi cấy vi sinh vật: tủ ấm, buồng cấy vi sinh vật

- Thiết bị phân tích lân tan: máy so màu, máy ly tâm

- Thiết bị đo lường: cân phân tích, cân kỹ thuật

- Dụng cụ thuỷ tinh: bình thuỷ tinh ml, ống nghiệm 180 x 15mm, pipet 1ml, 5ml, 10ml, ống đong, cốc thuỷ tinh, hộp lồng, bình định mức.

- Hoá chất làm môi trường: Đường sácarosa, Ca(PO₄) lexitin, (NH₄)₂SO₄, NaCl, MgSO₄, KCl, MnSO₄, FeSO₄, cao nấm men.

- Hoá chất phân tích: (NH₄)₆Mo₇O₂₄.7H₂O, HCl, ZnCl₂.7H₂O, H₂SO₄, KH₂PO₄

- Nước cất

2.2. Chuẩn bị:

2.2.1 Môi trường nuôi cấy:

Pha chế môi trường nuôi cấy có thành phần dưới đây và chia vào 8 ống nghiệm, mỗi ống 15 ml, khử trùng môi trường ở điều kiện 121^oC trong thời gian 15 phút.

Thành phần môi trường nuôi cấy vi sinh vật phân giải lân (môi trường pikovskaya)

- Ca₃(PO₄)₂                                            5,0g

- Sacaroza                                            10,0g

- (NH₄)₂SO₄                                            0,5g

- NaCl                                                   0,2g

- MgSO₄.7H₂O                                       0,1g

- KCl                                                     0,2g

- Cao nấm men                                      0,5g

- MnSO₄                                                                                                vết

- FeSO₄                                                 vết

- Nước cất                                            1000 ml

- pH                                                      7,0 ± 0,2g

Chú ý: Đối với chủng vi sinh vật hoặc phân vi sinh vật phân giải hợp chất phot pho hữu cơ khó tan trong thành phần môi trường nuôi cấy cần thay thế 5g Ca(PO₄)₂ bằng 2g lexitin.

2.2.2. Xây dựng đường chuẩn nồng độ phot pho

2.2.2.1. Chuẩn bị dung dịch:

2.2.2.1.1. Dung dịch axit clo molybdic

Cân chính xác 15g (NH₄)₆Mo₇O₂₄ vào 400ml nước cất nóng, lọc trong nếu cần và bổ sung thêm 400ml HCl 10N hoặc 342ml HCl 12N, lắc đều. Để nguội và cho thêm nước cất để thể tích dung dịch đạt l000ml. Bảo quản dung dịch trong lọ thuỷ tinh màu đến khi sử dụng.