TIÊU CHUẨN VIỆT NAM

TCVN 6401 : 1998

ISO 10560 : 1993 (E)

SỮA VÀ CÁC SẢN PHẨM SỮA – PHÁT HIỆN LISTERIA MONOCYTOGEN

Milk and milk products – Detection of Listeria monocytogenes

Lời nói đầu

TCVN 6401 : 1998 hoàn toàn tương đương với ISO 10560 : 1993 (E)

TCVN 6401 : 1998 do Ban kỹ thuật tiêu chuẩn TCVN/TC/F12 Sữa và sản phẩm sữa biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn – Đo lường – Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học, Công nghệ và Môi trường ban hành.

SỮA VÀ SẢN PHẨM SỮA – PHÁT HIỆN LISTERIA MONOCYTOGEN

Milk and milk products – Detection of Listeria monocytogenes

1. Phạm vi áp dụng

Tiêu chuẩn này quy định phương pháp phát hiện Listeria monocytogens trong sữa và sản phẩm sữa.

2. Tiêu chuẩn trích dẫn

TCVN 6404 : 1998 (ISO 7218:1997) Vi sinh vật học – Nguyên tắc chung về kiểm tra vi sinh vật.

TCVN 6263 : 1997 (ISO 8261:1989) Sữa và sản phẩm sữa – Chuẩn bị mẫu thử và các dung dịch pha loãng để kiểm tra vi sinh vật.

3. Định nghĩa

Áp dụng định nghĩa sau đây trong tiêu chuẩn này:

Listeria spp: Các vi sinh vật tạo thành các khuẩn lạc đặc trưng trên môi trường đặc chọn lọc và cho thấy rõ các đặc tính hình thái học, sinh lý học và sinh hóa như mô tả, khi tiến hành thử theo tiêu chuẩn này.

3.1.1. Listeria monocytogen: là một loài Listeria gây bệnh và có thể phân biệt với loài Listeria không gây bệnh khác có mặt trong sữa và sản phẩm sữa bằng các đặc tính sinh hóa nhất định.

3.2. Phát hiện Listeria monocytogen: là việc xác định sự có mặt hay không của các vi sinh vật này trong một khối lượng hay một thể tích được quy định, khi tiến hành thử theo tiêu chuẩn này.

4. Nguyên tắc

Nhìn chung, việc phát hiện Listeria spp, đòi hỏi ít nhất ba giai đoạn liên tục như trong 4.1 đến 4.3. Xem thêm sơ đồ qui trình thử trong hình 1.

Phần mẫu thử (25 g hoặc 25 ml)

+

Môi trường tăng sinh chọn lọc (225 ml)

Nuôi ấm ở 30^oC trong 48 h

¯

Ria cấy trên thạch Oxford

Nuôi ấm ở 37^oC trong 48 h

¯

Chọn năm khuẩn lạc đặc trưng từ mỗi đĩa

¯

Cấy vào môi trường TSYEA

Nuôi ấm ở 37^oC trong 24 h (hoặc lâu hơn, nếu cần)

¯

Các phép thử tiếp theo

Hình 1 – Sơ đồ qui trình thử

4.1. Tăng sinh trong môi trường lỏng chọn lọc

Cấy phần mẫu thử vào môi trường chọn lọc và nuôi ấm ở 30^oC trong 48 h.

4.2. Phân lập và nhận dạng sơ bộ

Cấy từ mẫu thử trong môi trường tăng sinh (4.1) vào môi trường phân lập, nuôi ấm ở 37^oC và sau 48 h kiểm tra sự có mặt các khuẩn lạc được coi là Listeria spp giả định theo dáng vẻ bên ngoài.

4.3. Khẳng định

Cấy truyền các khuẩn lạc Listeria spp. giả định (4.2) lên một môi trường đặc trưng không chọn l