Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 6329:2001 (hoàn toàn tương đương với tiêu chuẩn quốc tế ICUMSA GS2 - 33 : 1994) quy định phương pháp xác định hàm lượng sulphit trong đường trắng bằng phương pháp so màu Rosanilin. Đây là phương pháp chính thức được Bộ Khoa học Công nghệ và Môi trường ban hành, áp dụng rộng rãi trong hoạt động kiểm nghiệm chất lượng và an toàn thực phẩm đối với sản phẩm đường trắng.

- Phạm vi áp dụng (Điều 1)

• Tiêu chuẩn này quy định phương pháp xác định hàm lượng sulphit (được tính theo hàm lượng lưu huỳnh dioxit - SO2) tồn dư trong các sản phẩm đường trắng.
• Phương pháp so màu Rosanilin đặc biệt phù hợp để xác định hàm lượng sulphit ở mức độ vết, cụ thể là các mẫu đường có hàm lượng sulphit lên đến 15 mg/kg.
• Đối với các mẫu đường trắng có hàm lượng sulphit vượt quá ngưỡng 15 mg/kg, phương pháp vẫn có thể áp dụng hiệu quả bằng cách tiến hành pha loãng dung dịch mẫu thử một cách thích hợp trước khi thực hiện phản ứng tạo màu.

- Nguyên tắc của phương pháp (Điều 2)

• Phương pháp dựa trên phản ứng hóa học giữa sulphit có trong mẫu đường với formaldehyt và thuốc thử fuchsine axit (rosanilin hydroclorua đã được tẩy màu bằng axit) trong môi trường axit mạnh.
• Sự kết hợp này tạo ra một phức chất màu đỏ tím đặc trưng có tên là axit rosanilin-metylsulfonic với độ bền màu cao trong khoảng thời gian xác định.
• Cường độ màu của phức chất tỷ lệ thuận với nồng độ sulphit có trong dung dịch mẫu thử. Hàm lượng này được xác định chính xác bằng cách đo độ hấp thụ quang học của dung dịch ở bước sóng cực đại 560 nm trên máy quang phổ.

- Thuốc thử và hóa chất yêu cầu (Điều 3)

• Nước sử dụng trong toàn bộ quá trình chuẩn bị và tiến hành thử nghiệm phải là nước cất hoặc nước có độ tinh khiết tương đương, hoàn toàn không chứa các chất oxy hóa hoặc chất khử để tránh làm sai lệch kết quả đo.
• Dung dịch Rosanilin hydroclorua (thuốc thử fuchsine axit): Được chuẩn bị bằng cách hòa tan rosanilin hydroclorua trong nước và axit clohydric, sau đó tiến hành tẩy màu bằng các tác nhân khử phù hợp để thu được dung dịch không màu hoặc có màu vàng rất nhạt.
• Dung dịch Formaldehyt: Được pha loãng từ dung dịch formaldehyt thương mại đạt tiêu chuẩn tinh khiết phân tích để làm tác nhân liên kết trong phản ứng tạo phức màu.
• Dung dịch ổn định sulphit: Thường sử dụng các chất đệm hoặc chất che tạo phức để ngăn chặn sự oxy hóa tự nhiên của sulphit bởi oxy hòa tan trong nước và không khí trong suốt quá trình chuẩn bị và xử lý mẫu.
• Dung dịch sulphit chuẩn: Được chuẩn bị từ natri metabisulphit hoặc natri sulphit khan. Dung dịch này phải được chuẩn hóa lại bằng phương pháp chuẩn độ iod trước khi sử dụng để xây dựng đường chuẩn (đồ thị biểu diễn mối quan hệ giữa độ hấp thụ quang học và nồng độ sulphit).

- Thiết bị và dụng cụ thí nghiệm (Điều 4)

• Máy quang phổ phổ kế (Spectrophotometer) hoặc thiết bị so màu quang điện có khả năng đo độ hấp thụ quang học chính xác ở bước sóng 560 nm. Thiết bị cần được trang bị các cuvet (cell) có chiều dày đường quang thích hợp (thường là 1 cm hoặc 4 cm tùy thuộc vào nồng độ sulphit thực tế trong mẫu).
• Cân phân tích phòng thí nghiệm có độ chính xác cao, sai số không quá 0,1 mg, dùng để cân lượng mẫu đường trắng và các hóa chất tinh khiết khi pha chế thuốc thử.
• Hệ thống bình định mức đạt tiêu chuẩn đo lường (dung tích 50 ml, 100 ml, 1000 ml) để pha loãng mẫu và chuẩn bị các dung dịch làm việc.
• Pipet chính xác hoặc pipet tự động có dung tích phù hợp để định lượng chính xác thể tích thuốc thử, dung dịch chuẩn và dung dịch mẫu thử vào ống nghiệm.
• Bể điều nhiệt hoặc thiết bị kiểm soát nhiệt độ phòng thí nghiệm nhằm duy trì nhiệt độ ổn định trong suốt thời gian phản ứng tạo màu diễn ra, đảm bảo tính đồng nhất và độ lặp lại của phép đo.