TIÊU CHUẨN VIỆT NAM

TCVN 5164:1990

LƯƠNG THỰC

PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG

VITAMIN B1 (THIAMIN)

Cereals

Method of Determination of Vitamin B1 content

Tiêu chuẩn này quy định phương pháp huỳnh quang để xác định hàm lượng Vitamin B₁.

1. Nguyên tắc

Vitamin B₁ bị oxy hoá bởi kaly ferixyanua ở môi trường kiềm tạo thành thiocrom có huỳnh quang màu xanh da trời. Chiết thiocrom bằng isobutanol, đo mật độ huỳnh quang ở bước sóng thích hợp.

2. Lấy mẫu

Theo quy định về việc lấy mẫu đối với sản phẩm lương thực cụ thể

3. Hoá chất, dụng cụ và thiết bị

3.1. Hoá chất

- Natri axetat (TK.PT) dung dịch 2N: Hoà tan 15g natriaxetat ngậm nước vào nước cất và thêm nước cất vừa đủ 1 lít.

- Natri hydroxit (TK.PT) dung dịch 15%: Hoà tan 15g natri hydroxit trong nước và thêm nước cất vừa đủ 100 ml.

- Kali ferixyanua (TK.PT) dung dịch 1%: Hoà tan 1g kali ferixyanua trong nước cất và thêm nước cất vừa đủ 100 ml. Dung dịch pha chỉ dùng trong ngày.

- Chất oxy hoá: Hỗn hợp 4 ml dung dịch kali ferixyanua 1% với dung dịch natri hydroxit 15% đến vừa đủ 100 ml. Dung dịch pha dùng trong 4 giờ.

- Isobutanol (TK.PT)

- Vitamin B1 (TK.PT) dung dịch chuẩn: Cân khoảng 30-40mg với độ chính xác 0,0001 g thiamin clohydrat (đã làm khô trong bình hút ẩm) hoà tan trong bình định mức 1 lít bằng dung dịch cồn etylic 20% đã axit hoá bằng axit clohydric đến pH-3,5-4. Bảo quản ở nhiệt độ 10⁰C tránh ánh sáng.

- Kali clorua hay natri clorua; TK.HH;

3.2. Dụng cụ và thiết bị:

- Cân phân tích, cân kỹ thuật;

- Tủ sấy;

- Bình định mức, dung tích 1 lít, 250 ml;

- Cốc có mỏ, dung tích 250 ml;

- ống đong chia độ, dung tích 5 ml, 100 ml;

- Nồi cách thuỷ;

- Phễu lọc thuỷ tinh, dung tích 250 ml;

- ống nghiệm nút mài, dung tích 40-50ml;

- Pipet có bầu, dung tích 1ml, 5ml;

- Máy đánh nghiền hoặc cối chày sứ;

- Máy lắc;

- pH met;

- Huỳnh quang kế.

4. Tiến hành thử

4.1. Chiết vitamin B₁ ra khỏi mẫu lương thực:

Cân chính xác một lượng mẫu đã nghiền nhỏ trộn đều ước tính chứa khoảng 20-50mg thiamin cho vào cốc có mỏ dung tích 250ml. Tiến hành song song với dung dịch chuẩn bằng cách hút chính xác 1ml dung dịch chuẩn Vitamin B₁ cho vào cốc khác. Thêm vào các cốc, mỗi cốc 100ml dung dịch HCl 0,1N (pH=1-1,5), đậy nắp, đun cách thuỷ sôi 45 phút hoặc đun trong nồi áp suất (t⁰=110-120⁰C) trong 35 phút (kể từ khi đạt nhiệt độ). Để nguội đến nhiệt độ phòng, điều chỉnh pH các cốc bằng dung dịch natri axetat 2N đến pH = 4 - 4,5. Chuyển toàn bộ dịch ở mỗi cốc sau khi điều chỉnh pH vào bình định mức 250ml và thêm nước cất đến vạch. Lọc dung dịch bằng giấy lọc không hấ