Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 13452:2021 (hoàn toàn tương đương với tiêu chuẩn quốc tế ISO/TS 12869:2019) quy định các yêu cầu và hướng dẫn kỹ thuật liên quan đến việc phát hiện và định lượng vi khuẩn Legionella pneumophila bằng phản ứng chuỗi trùng hợp (PCR). Tiêu chuẩn này do Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học và Công nghệ công bố, nhằm thống nhất phương pháp xét nghiệm vi sinh vật trong nguồn nước và môi trường.

Phạm vi và đối tượng áp dụng của tiêu chuẩn

TCVN 13452:2021 áp dụng đối với các phòng thử nghiệm, tổ chức khoa học công nghệ và các đơn vị thực hiện việc quan trắc, kiểm nghiệm chất lượng nước. Đối tượng điều chỉnh trực tiếp là quy trình kỹ thuật sử dụng máy chu trình nhiệt, các trình tự mồi, đoạn dò và hệ thống đối chứng nội nhằm đảm bảo độ chính xác trong việc phát hiện vi khuẩn L. pneumophila.

Nội dung kỹ thuật cốt lõi về chương trình máy chu trình nhiệt

Tiêu chuẩn đưa ra các quy định chi tiết và nghiêm ngặt đối với việc thiết lập và vận hành chương trình máy chu trình nhiệt trong quá trình xét nghiệm sinh học phân tử, cụ thể bao gồm các nội dung sau:

• Ứng dụng chương trình máy chu trình nhiệt chuẩn: Tiêu chuẩn chỉ ra ví dụ cụ thể về chương trình máy chu trình nhiệt tại Bảng 3 để làm cơ sở thực hiện việc phát hiện vi khuẩn L. pneumophila. Quá trình này bắt buộc phải sử dụng các trình tự mồi và đoạn dò đặc hiệu đã được quy định chi tiết tại mục 7.3.2 của tiêu chuẩn.
• Yêu cầu hiệu chỉnh và đánh giá xác nhận thiết bị: Do sự khác biệt về công nghệ giữa các nhà sản xuất, chương trình nhiệt không được áp dụng một cách máy móc mà phải được điều chỉnh tối ưu theo từng model và kiểu máy chu trình nhiệt cụ thể tại phòng thử nghiệm. Mọi sự điều chỉnh này đều phải trải qua quy trình đánh giá xác nhận nghiêm ngặt theo đúng các yêu cầu kỹ thuật được nêu tại Điều 9 của tiêu chuẩn nhằm bảo đảm tính pháp lý và độ tin cậy của kết quả.
• Thiết lập hệ thống đo tín hiệu huỳnh quang: Chương trình máy chu trình nhiệt phải được thiết lập một cách đồng bộ để trong suốt quá trình sao chép, khuếch đại ADN, hệ thống phải ghi nhận và đo lường được đồng thời hai loại tín hiệu huỳnh quang. Đó là tín hiệu từ đoạn dò đặc hiệu phát hiện vi khuẩn L. pneumophila và tín hiệu từ đoạn dò đặc hiệu đối chứng nội PCR (IAC). Việc đo đối chứng nội là bắt buộc để loại trừ các trường hợp âm tính giả do tác nhân ức chế phản ứng PCR.

Hiệu lực thi hành

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 13452:2021 có hiệu lực áp dụng kể từ ngày được Bộ Khoa học và Công nghệ công bố. Các phòng thử nghiệm được khuyến khích cập nhật và áp dụng tiêu chuẩn này để nâng cao năng lực xét nghiệm và bảo đảm tính tương thích quốc tế trong hoạt động kiểm nghiệm vi sinh.