Giới thiệu chung về Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 10388:2014

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 10388:2014 hoàn toàn tương đương với tiêu chuẩn châu Âu EN 12138:1997. Đây là văn bản kỹ thuật quy định phương pháp xác định hàm lượng axit D-malic trong nước rau, quả bằng phương pháp enzym sử dụng phép đo phổ NAD (Nicotinamide Adenine Dinucleotide). Việc kiểm nghiệm này đóng vai trò quan trọng trong việc đánh giá chất lượng sản phẩm, phát hiện các hành vi gian lận thương mại như việc bổ sung axit malic tổng hợp trái phép vào nước quả tự nhiên.

Phạm vi áp dụng (Điều 1)

Điều khoản này xác định rõ giới hạn và đối tượng áp dụng của phương pháp thử nghiệm:

• Phương pháp được áp dụng đối với tất cả các loại nước rau, quả, nước quả cô đặc và các sản phẩm nước trái cây tương tự lưu thông trên thị trường.
• Mục đích chính là xác định chính xác hàm lượng axit D-malic (một đồng phân không xuất hiện tự nhiên với lượng lớn trong trái cây tươi) để kiểm soát tính nguyên chất của sản phẩm.

Tài liệu viện dẫn (Điều 2)

Để áp dụng tiêu chuẩn này một cách chính xác và đồng bộ, các phòng thử nghiệm cần kết hợp viện dẫn các tài liệu tiêu chuẩn liên quan:

• Các tiêu chuẩn quốc gia hoặc quốc tế về lấy mẫu và chuẩn bị mẫu thử đối với nước rau, quả.
• Các tài liệu hướng dẫn chung về an toàn phòng thí nghiệm hóa sinh và quy trình vận hành thiết bị đo quang phổ.

Nguyên tắc của phương pháp (Điều 3)

Phương pháp đo phổ NAD dựa trên phản ứng hóa sinh đặc hiệu của enzym được mô tả chi tiết như sau:

• Axit D-malic có trong mẫu thử được oxy hóa bởi nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) dưới sự xúc tác của enzym D-malat dehydrogenase (D-MDH) để tạo thành oxaloaxetat và NADH.
• Lượng NADH được tạo thành trong phản ứng này tỷ lệ thuận với lượng axit D-malic ban đầu có trong mẫu thử.
• Hàm lượng NADH sinh ra được xác định thông qua phép đo độ hấp thụ quang học (đo phổ) ở bước sóng thích hợp, thông thường là 340 nm (hoặc tại các vạch phổ 334 nm, 365 nm).

Thuốc thử và vật liệu thử (Điều 4)

Tiêu chuẩn đưa ra các yêu cầu nghiêm ngặt về chất lượng hóa chất và thuốc thử nhằm đảm bảo độ chính xác và độ lặp lại của kết quả:

• Nước tinh khiết: Phải sử dụng nước cất hoặc nước có độ tinh khiết tương đương, hoàn toàn không chứa các tạp chất gây ức chế hoạt tính của enzym.
• Dịch đệm (Buffer solution): Có độ pH thích hợp để tối ưu hóa hoạt động xúc tác của enzym D-MDH trong suốt quá trình phản ứng xảy ra.
• Dung dịch NAD: Chất đồng xúc tác cần thiết cho phản ứng oxy hóa khử, phải được bảo quản ở điều kiện nhiệt độ tiêu chuẩn để tránh phân hủy.
• Enzym D-malat dehydrogenase (D-MDH): Phải có độ hoạt tính cao, tinh khiết và không lẫn các enzym tạp nhiễm khác có khả năng gây phản ứng phụ với các thành phần đường hoặc axit khác trong nước quả.
• Dung dịch chuẩn axit D-malic: Sử dụng để xây dựng đường chuẩn hoặc kiểm tra hiệu năng, độ chính xác của hệ thống máy đo phổ.