TIÊU CHUẨN VIỆT NAM

TCVN 5461:1991

CHẤT TẨY RỬA TỔNG HỢP CHỨA ENZYM

PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HOẠT ĐỘ PROTEIN

Synthetical Detergent

Method for the determination of proteinous activity

Tiêu chuẩn này phù hợp với ST SEV 4156-83

1. Nguyên tắc của phương pháp

Phương pháp dựa trên sự thuỷ phân của cazein ở ph 10,5, nhiệt độ 40⁰ C và xác định hàm lượng tirazin trong dịch thuỷ phân bằng phép đo màu với thuốc thử folin

2. Thiết bị và dụng cụ

2.1 Máy điều hoà nhiệt đảm bảo nhiệt độ ( 40 ± 0,1)⁰ C

2.2 Ph met

2.3 Máy khuấy từ

2.4 Máy đo màu quang điện

2.5 Phễu thuỷ tinh đường kính 5 đến 7 mm.

2.6 B ếp c ách thu ỷ

2.7 Ống nghi ệm thu ỷ tinh đ ư ờng k ính 15 đ ến 19 mm, cao 150 đ ến 180 mm

2.8 Gi ấy ch ỉ th ị ( kali iodua)

3. Thu ốc th ử v à dung dịch

Khi xác định, dùng các hoá chất loại tinh khiết hoá học hoặc tinh khiết phân tích và dùng nước cất phù hợp với TCVN 2117-77.

Các thuốc thử được cân với độ chính xác 0,01 g.

3.1 Cazein theo Hammersten.

3.2 Natri hidroxit , dung dịch 1 mol/dm³

3.3 Natri vonframat ( Na₂ WO₄ . H₂O )

3.4 Natri molipdat ( Na₂ MoO₄ . 2H₂O )

3.5 Axit otophotphoric, d 1,689 g /cm³.

3.6 Axit clohidric đặc

3.7 Lithi sunfat ( Li₂SO₄ )

3.8 Brom

3.9 Natri bicacbonat, dung dịch 0,2 mol / dm³, chuẩn bị như sau:cân 16,8 g natri bicacbonat, chuyển vào bình định mức dung tích 1000 cm³ và dùng nước định mức đến vạch.

3.10 Natri cacbonat, dung dịch 0,2 mol /dm³, chuẩn bị như sau: cân 21,2 g natri cacbonat khan, chuyển vào bình định mức dung tích 1000 cm³ và dùng nước định mức dến vạch.

3.11 Dung dịch đệm, chuẩn bị như sau : cho 45 cm³ dung dịch natri cacbonat và 5 cm³ dung dịch natri cacbonat vào bình định mức dung tích 200 cm³, thêm nước đến vchj mức và lắc đều.

3.12. Cazein , dung dịch 1 % ( chất nền ), chuẩn bị như sau : cân 2 g cazein theo Hammerstan chính xác đến 0,0001 g, chuyển vào bình nón dung tích 300 cm³ và thêm 140 cm³ dung dịch đệm pH 10,7. Đặt bình nón lên máy khuấy từ và dung dịch 30 phút, sau đó vừa khuấy vừa đun nóng dung dịch trên bếp cách thuỷ ở 70 ⁰C đến hoà tan hoàn toàn.

Để nguội dung dịch đến nhiệt độ 40⁰C và đưa pH đến 10,5 bằng dung dịch natri hidroxit . Sau đó chuyển dung dịch cazein từ bình nón vào bình định mức dung tích 200 cm³ và dung dịch đệm đưa thể tích đến 180 -190 cm³.

Tiếp tục làm lạnh dung dịch cazein bằng dòng nước đến 20⁰C và dùng dung dịch đệm đưa thể tích đến 200 cm³ . Thời hạn bảo quản dung dịch cazein trong tủ lạnh không quá hai ngày. Rót 700 cm³ nước vào bình dung tíc