Giới thiệu chung về Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 9519-2:2016 (EN 1988-2:1998)

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 9519-2:2016 hoàn toàn tương đương với tiêu chuẩn châu Âu EN 1988-2:1998. Tiêu chuẩn này quy định phương pháp enzym để xác định hàm lượng sulfit trong các sản phẩm thực phẩm. Đây là phương pháp phân tích hiện đại, có độ nhạy cao và tính đặc hiệu tốt, giúp kiểm soát hàm lượng chất bảo quản sulfit nhằm đảm bảo an toàn vệ sinh thực phẩm theo các quy chuẩn kỹ thuật hiện hành.

Điều 1: Phạm vi áp dụng

Điều khoản này xác định giới hạn và đối tượng áp dụng của phương pháp phân tích:

• Phương pháp enzym này được áp dụng để xác định hàm lượng sulfit (được biểu thị dưới dạng lưu huỳnh dioxit - SO2) có trong các loại thực phẩm.
• Giới hạn định lượng của phương pháp: Áp dụng hiệu quả cho các mẫu thực phẩm có hàm lượng sulfit bằng hoặc lớn hơn 10 mg/kg.
• Đối tượng áp dụng bao gồm nhiều nhóm thực phẩm khác nhau, đặc biệt là các sản phẩm rau quả chế biến, đồ uống (như rượu vang, nước trái cây) và các loại thực phẩm có sử dụng sulfit làm chất bảo quản hoặc chất chống oxy hóa.

Điều 2: Tài liệu viện dẫn

Để áp dụng tiêu chuẩn này một cách chính xác, việc viện dẫn các tài liệu liên quan là bắt buộc:

• Các tài liệu viện dẫn bao gồm các tiêu chuẩn về lấy mẫu và chuẩn bị mẫu thử đối với từng nhóm thực phẩm cụ thể nhằm đảm bảo tính đại diện của mẫu phân tích.
• Yêu cầu về chất lượng nước dùng trong phòng thử nghiệm phân tích phải tuân thủ các tiêu chuẩn quốc gia hoặc quốc tế tương đương (thường yêu cầu nước loại 3 hoặc cao hơn để tránh ảnh hưởng đến hoạt lực của enzym).

Điều 3: Nguyên tắc của phương pháp

Nguyên tắc cốt lõi của phương pháp enzym xác định sulfit dựa trên chuỗi phản ứng sinh hóa đặc hiệu sau:

• Sulfit (SO3 2-) có trong mẫu thử được oxy hóa bởi enzym sulfite oxidase (SOD) để tạo thành sulfat (SO4 2-) và hydro peroxit (H2O2).
• Hydro peroxit tạo thành tiếp tục phản ứng với nicotinamid adenin dinucleotid dạng khử (NADH) dưới sự xúc tác của enzym NADH-peroxidase (POD) để tạo ra nicotinamid adenin dinucleotid dạng oxy hóa (NAD+) và nước.
• Lượng NADH bị tiêu hao trong phản ứng tỷ lệ thuận với lượng sulfit ban đầu có trong mẫu thử. Sự suy giảm nồng độ NADH được đo bằng cách xác định độ hấp thụ quang phổ ở bước sóng 340 nm.

Điều 4: Thuốc thử và vật liệu thử

Để đảm bảo độ chính xác và độ lặp lại của kết quả thử nghiệm, các thuốc thử và vật liệu phải đáp ứng các yêu cầu nghiêm ngặt:

• Nước sử dụng phải là nước cất hoặc nước có độ tinh khiết tương đương, hoàn toàn không chứa các chất gây ức chế hoạt tính của enzym.
• Dung dịch đệm thích hợp để duy trì và ổn định trị số pH tối ưu cho hoạt động xúc tác của các enzym sulfite oxidase và NADH-peroxidase.
• Các chế phẩm enzym thương mại (sulfite oxidase, NADH-peroxidase) phải có hoạt độ xác định và được bảo quản nghiêm ngặt ở điều kiện nhiệt độ theo hướng dẫn của nhà sản xuất để tránh bị mất hoạt tính.
• Chất chuẩn sulfit (ví dụ: natri sulfit hoặc natri metabisulfit) có độ tinh khiết hóa học cao để xây dựng đường chuẩn và kiểm tra độ thu hồi của phép phân tích.