Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8975:2011 (hoàn toàn tương đương với EN 14152:2003 và đính chính kỹ thuật năm 2005) là văn bản kỹ thuật quan trọng quy định phương pháp xác định hàm lượng vitamin B2 (riboflavin) trong thực phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC). Dưới đây là tóm tắt chi tiết các nội dung cốt lõi từ Phần mở đầu đến Điều 4 của tiêu chuẩn này.

- Thông tin tổng quan về tiêu chuẩn

• Tên tiêu chuẩn: Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8975:2011 (EN 14152 : 2003, đính chính kỹ thuật 2005) về Thực phẩm - Xác định vitamin B2 bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC).
• Mục đích ban hành: Thiết lập phương pháp chuẩn hóa, có độ chính xác và độ lặp lại cao để định lượng vitamin B2 trong các loại nền mẫu thực phẩm khác nhau, phục vụ công tác kiểm nghiệm an toàn thực phẩm và công bố chất lượng sản phẩm.

- Phạm vi áp dụng (Điều 1)

• Tiêu chuẩn này quy định phương pháp xác định hàm lượng vitamin B2 trong thực phẩm bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC).
• Phương pháp này cho phép xác định riboflavin (vitamin B2) tự do và các dạng liên kết của nó sau khi đã được chuyển hóa.
• Phạm vi áp dụng bao gồm nhiều loại sản phẩm thực phẩm khác nhau, giúp các phòng thử nghiệm thống nhất quy trình phân tích trên toàn quốc.

- Tài liệu viện dẫn (Điều 2)

• Tiêu chuẩn viện dẫn các tài liệu kỹ thuật quốc tế và quốc gia liên quan để đảm bảo tính đồng bộ trong quá trình thực hiện. Các tài liệu viện dẫn bao gồm các tiêu chuẩn về lấy mẫu, chuẩn bị mẫu thử và các yêu cầu chung đối với phòng thử nghiệm hóa học thực phẩm.
• Đối với các tài liệu viện dẫn ghi năm công bố thì áp dụng bản được nêu. Đối với các tài liệu viện dẫn không ghi năm công bố thì áp dụng phiên bản mới nhất, bao gồm cả các sửa đổi, bổ sung (nếu có).

- Nguyên tắc của phương pháp (Điều 3)

• Trích ly và thủy phân: Vitamin B2 trong mẫu thực phẩm được giải phóng bằng cách thủy phân bằng axit (thường là axit clohydric hoặc axit sunfuric loãng) ở nhiệt độ cao, sau đó tiến hành xử lý bằng enzym (như phosphatase hoặc amylase) để chuyển hóa các dạng liên kết (FAD, FMN) thành riboflavin tự do.
• Tách sắc ký: Dịch chiết sau khi làm sạch và lọc được bơm vào hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC). Quá trình tách được thực hiện trên cột pha đảo (C18 hoặc tương đương).
• Phát hiện và định lượng: Vitamin B2 (riboflavin) được phát hiện bằng đầu dò huỳnh quang (fluorescence detector) với bước sóng kích thích và bước sóng phát xạ đặc trưng, hoặc đầu dò tử ngoại - khả kiến (UV-Vis) ở bước sóng phù hợp. Hàm lượng được tính toán dựa trên đường chuẩn của chất chuẩn riboflavin tinh khiết.

- Hóa chất và thuốc thử (Điều 4)

• Yêu cầu chung: Tất cả các hóa chất, thuốc thử được sử dụng phải thuộc loại tinh khiết phân tích dùng cho sắc ký (HPLC grade) và nước sử dụng phải là nước cất hai lần hoặc nước có độ tinh khiết tương đương.
• Chất chuẩn: Riboflavin chuẩn (vitamin B2) có độ tinh khiết đã biết, được bảo quản tránh ánh sáng trực tiếp để ngăn ngừa sự phân hủy quang học.
• Dung dịch đệm và dung môi: Các dung dịch đệm photphat hoặc axetat được điều chỉnh pH thích hợp để làm pha động; các dung môi hữu cơ như metanol hoặc axetonitril đạt tiêu chuẩn dùng cho HPLC.
• Các chế phẩm enzym: Các enzym thủy phân (ví dụ: takadiastase, acid phosphatase) phải đảm bảo hoạt tính sinh học và không chứa tạp chất gây nhiễu pic của riboflavin trên sắc ký đồ.