Giới thiệu chung về Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 9980:2013

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 9980:2013 quy định phương pháp định lượng vi khuẩn họ Enterobacteriaceae trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi bằng cách sử dụng đĩa đếm Petrifilm. Đây là một phương pháp hiện đại, nhanh chóng và có độ chính xác cao, giúp tối ưu hóa quy trình kiểm nghiệm vi sinh so với các phương pháp truyền thống sử dụng môi trường thạch đĩa thông thường.

- Phạm vi áp dụng (Điều 1)

• Tiêu chuẩn này quy định quy trình kỹ thuật cụ thể để định lượng vi khuẩn thuộc họ Enterobacteriaceae có trong các sản phẩm thực phẩm phục vụ cho con người.
• Tiêu chuẩn cũng áp dụng hoàn toàn đối với các sản phẩm thức ăn chăn nuôi, nguyên liệu sản xuất thức ăn chăn nuôi và các mẫu môi trường trong khu vực sản xuất, chế biến thực phẩm.
• Phương pháp sử dụng đĩa đếm Petrifilm Enterobacteriaceae (đĩa Petrifilm EB) được thiết kế để thay thế hoặc bổ sung cho các phương pháp đổ đĩa truyền thống, giúp rút ngắn thời gian phân tích và giảm thiểu thao tác chuẩn bị môi trường phức tạp.

- Tài liệu viện dẫn (Điều 2)

• Để áp dụng tiêu chuẩn này một cách chính xác và đồng bộ, cần phải viện dẫn và phối hợp sử dụng các tài liệu tiêu chuẩn liên quan về vi sinh vật học thực phẩm và thức ăn chăn nuôi.
• TCVN 6404 (ISO 7218) về Nguyên tắc chung về kiểm tra vi sinh vật: Đây là tài liệu nền tảng quy định các yêu cầu kỹ thuật chung, trang thiết bị, phòng thí nghiệm và cách thức vận hành trong phân tích vi sinh.
• Các tiêu chuẩn thuộc bộ TCVN 6507 (ISO 6887) về chuẩn bị mẫu thử, huyền phù ban đầu và các dung dịch pha loãng thập phân để kiểm tra vi sinh vật đối với từng loại thực phẩm cụ thể.
• Trong trường hợp các tài liệu viện dẫn có sự thay đổi, bổ sung hoặc được thay thế bằng phiên bản mới, người sử dụng cần áp dụng phiên bản mới nhất của tài liệu đó.

- Thuật ngữ và định nghĩa (Điều 3)

• Enterobacteriaceae trên đĩa Petrifilm: Được định nghĩa là các vi sinh vật hình thành các khuẩn lạc đặc trưng trên đĩa đếm Petrifilm Enterobacteriaceae dưới các điều kiện nuôi cấy được quy định trong tiêu chuẩn này.
• Khuẩn lạc đặc trưng của Enterobacteriaceae trên đĩa Petrifilm EB là những khuẩn lạc màu đỏ, có kèm theo bọt khí và/hoặc có vùng màu vàng xung quanh khuẩn lạc (vùng màu vàng xuất hiện do quá trình lên men glucose sinh axit làm thay đổi màu của chất chỉ thị pH).
• Định nghĩa này đóng vai trò quyết định giúp kiểm nghiệm viên nhận diện chính xác đối tượng cần đếm, tránh nhầm lẫn với các nhóm vi khuẩn khác không thuộc họ Enterobacteriaceae.

- Nguyên tắc của phương pháp (Điều 4)

• Phương pháp dựa trên việc sử dụng đĩa đếm Petrifilm Enterobacteriaceae đã được chuẩn bị sẵn, chứa các chất dinh dưỡng thích hợp cho sự phát triển của họ vi khuẩn này, chất tạo gel hòa tan trong nước lạnh và chất chỉ thị màu để phát hiện hoạt độ enzyme cũng như khả năng sinh axit/khí.
• Mẫu thử được đồng nhất và pha loãng theo các bậc thập phân thích hợp bằng dung dịch pha loãng tiêu chuẩn.
• Huyền phù mẫu hoặc dung dịch pha loãng được cấy trực tiếp lên đĩa Petrifilm EB với thể tích quy định (thường là 1 ml).
• Tiến hành ủ đĩa ở nhiệt độ thích hợp (thường là 35 độ C hoặc 37 độ C) trong khoảng thời gian quy định (thường là 24 giờ).
• Sau thời gian ủ, tiến hành đếm các khuẩn lạc màu đỏ có bọt khí và/hoặc có vùng màu vàng xung quanh để tính toán mật độ Enterobacteriaceae có trong một đơn vị khối lượng (g) hoặc thể tích (ml) mẫu ban đầu.